慢病毒相关服务[HB-LV-PKG]

慢病毒（Lentivirus）载体是以 HIV-1（人类免疫缺陷病毒 1 型）为基础发展的基因递送工具，可感染分裂期与静止期细胞，并将外源基因整合至宿主基因组实现长期稳定表达。本服务采用三质粒系统（psPAX2、pMD2.G、pHBLV 系列）共转染 293T 细胞完成包装，经浓缩纯化、滴度测定与质量检测后交付，适用于细胞水平基因过表达、RNA 干扰、miRNA / circRNA / LncRNA 研究、CRISPR/Cas9 基因编辑、稳转细胞系构建及动物活体实验。

一、服务特点

• 感染范围广：可有效感染分裂和非分裂细胞，适合几乎所有细胞系，如神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等。
• 可稳定表达：可将外源基因整合到宿主细胞基因组上，不随细胞分裂传代而丢失，实现目的基因长时间稳定表达。
• 操作安全性高：采用自失活复制缺陷型病毒株，保障操作安全。
• 滴度与质控可验收：标准交付滴度 ≥1×10⁸ TU/mL，高滴度版本可达 1×10⁹ TU/mL；随附支原体、内毒素、细菌真菌与活性滴度检测结果。

二、核心参数

表 1　服务核心参数

项目	内容
服务名称	慢病毒包装服务（定制）
品牌	汉恒生物（Hanbio）
包装系统	三质粒系统：psPAX2、pMD2.G、pHBLV 系列目的载体，共转染 293T 细胞
交付滴度	标准 ≥1×108 TU/mL；高滴度版本可达 1×109 TU/mL
交付规格	按合同约定滴度与总量分装，目的病毒 + 对照病毒
纯化与质控	离心或浓缩柱浓缩纯化；支原体、内毒素、细菌、真菌检测；感染法测定活性滴度
保存与运输	干冰运输；建议分装保存、避免反复冻融
适用范围	普通细胞系感染；难转染细胞（如悬浮细胞）及动物活体水平感染

注：滴度单位 TU/mL，以感染法测定；交付周期以合同约定为准，不含运输时间。

三、服务范围与滴度规格

可定制服务类型：

• 常规基因过表达 / 干扰慢病毒
• miRNA sponge / antago 慢病毒
• circRNA / LncRNA 过表达和干扰慢病毒
• CRISPR/Cas9 慢病毒定制
• 慢病毒构建稳转细胞系
• 慢病毒现货

表 2　滴度规格与适用范围

提供产品	滴度	适用范围
常规滴度慢病毒	1×108 TU/mL	适用于普通细胞系感染
高滴度慢病毒	1×109 TU/mL	适用于难转染细胞系（如悬浮细胞），或用于动物活体水平感染

注：慢病毒现货为已构建好的成品，省去基因合成与慢病毒质粒构建步骤，到货周期更快；可按基因名、基因 ID 或 NM 号查询库存。

四、常用载体选择

表 3　常用慢病毒载体元件与筛选标记

编号	调控方式	元件顺序	原核抗性	真核抗性	荧光标记	启动子
LV005	过表达	pHBLV-CMV-MCS-EF1-mCherry-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	mCherry	CMV
LV006	过表达	pHBLV-CMV-MCS-3flag-EF1-mCherry-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	mCherry	CMV
LV007	过表达	pHBLV-CMV-MCS-EF1-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	无	CMV
LV008	过表达	pHBLV-CMV-MCS-3flag-EF1-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	无	CMV
LV011	过表达	pHBLV-CMV-MCS-3flag-EF1-ZsGreen-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	ZsGreen	CMV
LV012	过表达	pHBLV-CMV-MCS-EF1-ZsGreen-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	ZsGreen	CMV
LV052	过表达	pHBLV-CMV-MCS-EF1-ZsGreen	Ampicillin	无	ZsGreen	CMV
LV05	过表达	pHBLV-CMV-MCS-3flag-EF1-ZsGreen	Ampicillin	无	ZsGreen	CMV
LV081	过表达	pHBLV-EF1-MCS-CMV-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	无	EF1
LV082	过表达	pHBLV-EF1-MCS-CMV-ZsGreen	Ampicillin	无	ZsGreen	EF1
LV083	过表达	pHBLV-EF1-MCS-CMV-ZsGreen-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	ZsGreen	EF1
LV121	过表达	pHBLV-CMV-MCS-3flag-EF1-Luc-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	Luciferase	CMV
LV122	过表达	pHBLV-CMV-MCS-EF1-Luc-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	Luciferase	CMV
LV027	过表达 TetOn	pHBLV-TetOn-SV40-Puromycin-TRE3GS-MCS	Ampicillin	Puromycin	无	TRE3GS
LV019	干扰	pHBLV-U6-MCS-PGK-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	无	U6
LV020	干扰	pHBLV-U6-MCS-CMV-ZsGreen	Ampicillin	无	ZsGreen	U6
LV021	干扰	pHBLV-U6-MCS-CMV-ZsGreen-PGK-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	ZsGreen	U6
LV051	干扰	pHBLV-U6-MCS-EF1-mCherry-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	mCherry	U6
LV124	干扰	pHBLV-U6-MCS-EF1-Luc-T2A-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	Luciferase	U6
LV144	干扰	pHBLV-U6-MCS-CMV-mCherry	Ampicillin	无	mCherry	U6
LV050	cas9/gRNA	pHBLV-U6-gRNA-EF1-CAS9-Puromycin	Ampicillin	Puromycin	无	U6
LV055	cas9/gRNA	pHBLV-U6-gRNA-EF1-ZsGreen	Ampicillin	无	ZsGreen	U6
LV133	cas9/gRNA	pHBLV-U6-gRNA-EF1-ZsGreen-Luc	Ampicillin	无	Luciferase	U6

注：以上为常用载体，原核抗性均为 Ampicillin；如需其他元件组合、启动子、荧光标记或筛选抗性，可在询价时说明需求，载体编号以方案确认为准。

五、服务流程

采用三质粒系统（psPAX2、pMD2.G、pHBLV 系列）共转染 293T 细胞，经质粒构建、抽提、包装、浓缩、滴度测定与质控后交付，标准流程共 6 步：

1. 01　慢病毒目的质粒构建：根据需求获取目的基因，或设计合成 shRNA / sgRNA，克隆至 pHBLV 系列慢病毒目的载体；同步准备 psPAX2、pMD2.G 包装辅助质粒。
2. 02　质粒的大量抽提：使用去内毒素试剂盒对三种质粒大量抽提，控制内毒素水平，满足 293T 细胞转染要求。
3. 03　转染 293T 细胞包装病毒：三质粒系统共转染 293T 细胞，转染后更换培养基继续培养，收集含病毒上清液。
4. 04　病毒收集、浓缩与纯化：分别于转染后 48 h 与 72 h 两次收集病毒上清，经离心或浓缩柱浓缩纯化，提高单位体积滴度。
5. 05　滴度测定与质量检测：病毒原液梯度稀释后感染 293T 细胞，以感染法测定活性滴度；同步完成支原体、内毒素及细菌真菌污染检测。
6. 06　产品交付：按合同约定滴度将目的病毒与对照病毒分装交付，随附使用说明与技术支持，干冰运输。

标准慢病毒交付滴度 ≥ 1×10⁸ TU/mL；高滴度版本可达 1×10⁹ TU/mL，适用于难转染细胞（如悬浮细胞）及动物活体水平感染。

六、质量控制标准

表 4　质量检测项目与合格标准

检测项目	检测方法	检测结果
支原体	PCR	阴性
内毒素	LAL	合格
细菌	培养法	阴性
真菌	培养法	阴性
活性滴度	感染法	≥1×108 TU/mL

注：检测结论以随货质检报告为准；如需追加检测项目，可在方案确认阶段提出。

七、交付内容与保存运输

• 病毒产品：按合同约定滴度交付目的病毒与对照病毒，分装发货。
• 随附资料：使用说明与技术支持，含复溶/使用与感染条件建议。
• 质检信息：活性滴度及支原体、内毒素、细菌真菌检测结果。
• 运输方式：干冰运输。
• 保存建议：建议分装保存、避免反复冻融。

八、应用场景与感染实例

适用实验方向：细胞系基因过表达与 RNA 干扰、miRNA sponge / antago、circRNA / LncRNA 功能研究、CRISPR/Cas9 基因编辑、稳转细胞系构建、难转染细胞（如悬浮细胞）感染以及动物活体水平感染与成像。

已有感染实例的细胞系（官网验证图示例）：
U-87、PC3、Hep-3B、ECA109、HCM、A549
HepG2、HN6、ARPE-19、PC9、siha、HeLa
293T、EC 9706、MC3T3-E1、HT29、Mda-mb-231、MGC-803
SW620、U-373 MG、B16-F10、NIH3T3、SGC-7901、CT26
RAW264.7、H9C2、MKN1、M1、T24、MSC
MKN45、786-0、Atp-1、Lo2、143B、jurkat

表 5　感染复数（MOI）参考

细胞系	MOI 参考值
Hep3b	MOI = 2
Thp-1	MOI = 200
HCT116	MOI = 5

注：不同细胞系对慢病毒敏感性差异较大，上表仅为官网展示实例的参考值，正式实验前建议通过预实验摸索 MOI 与感染条件。

九、常见问题

Q1　质粒载体和慢病毒载体的区别？如何选择？

质粒（Plasmid）是能够自主复制的较小 DNA 分子，一般在转染试剂辅助下进入细胞；慢病毒载体是以 HIV-1 来源的基因递送载体，可直接感染分裂细胞和非分裂细胞。选择时需综合考虑实验周期、实验预算、目的基因片段大小、是否需要稳定转染：质粒成本较低、周期较短、载体容量大，但转染效率通常低于病毒感染效率，且整合基因组概率极低；如需构建稳定细胞株，选择慢病毒更合适。

Q2　慢病毒载体和腺病毒载体，该怎么选？

（1）插入目的序列大小：慢病毒包装容量一般建议在 3 kb 以内，超过可能影响病毒滴度；腺病毒包装容量可达 8 kb；滴度会随目的序列增大而降低。（2）是否需要构建稳转细胞株：慢病毒可将外源基因整合至细胞基因组并稳定遗传，可用于构建稳转细胞株，也可做瞬时表达；腺病毒不整合基因组，只适用于瞬时转染。（3）目的细胞类型：神经细胞、部分原代细胞等感染难度较大的细胞，且后续无需建立稳转株时，可考虑腺病毒。

Q3　慢病毒包装系统是什么？

以三质粒系统为主，组成为 psPAX2、pMD2.G、pHBLV 系列质粒；如需其他包装系统，可在方案确认阶段说明需求。

Q4　慢病毒现货与其他慢病毒包装服务的区别？

慢病毒现货为已构建好的成品，省去基因合成、慢病毒质粒构建等步骤，到货周期更快，可按基因名、基因 ID 或 NM 号查询是否有对应现货；其他包装服务则按客户指定的目的基因、载体元件与滴度要求定制。

十、客户发表文献节选

• Ferroptotic stress facilitates smooth muscle cell dedifferentiation in arterial remodelling by disrupting mitochondrial homeostasis（Cell Death & Differentiation，IF=12.4，海军军医大学）
• Downregulation of MUS81 expression inhibits cell migration and maintains EBV latent（Journal of Medical Virology，IF=12.7，青岛大学）
• LITTIP/Lgr6/HnRNPK complex regulates cementogenesis via Wnt signaling（International Journal of Oral Science，IF=14.9，四川大学华西口腔医院）
• CD8 T Cell-Derived Exosomal miR-186-5p Elicits Renal Inflammation via Activating Tubular TLR7/8 Signal Axis（Advanced Science，IF=15.1，南京大学）
• TRPC channels blockade abolishes endotoxemic cardiac dysfunction by hampering intracellular inflammation and Ca2+ leakage（Nature communications，IF=16.6，第四军医大学）
• NDFIP1 limits cellular TAZ accumulation via exosomal sorting to inhibit NSCLC proliferation（Protein & Cell，IF=21.1，上海交通大学）
• KIAA1429 promotes tumorigenesis and gefitinib resistance in lung adenocarcinoma by activating the …（Drug Resistance Updates，IF=24.3，南方医科大学；官网题名至此截断）
• HDAC1/2/3 are major histone desuccinylases critical for promoter desuccinylation（Cell Discovery，IF=33.5，华东师范大学芜湖医院）
• A novel polypeptide encoded by the circular RNA ZKSCAN1 suppresses HCC via degradation of mTOR（Molecular Cancer，IF=37.3，中国农业大学）
• The cGAS-STING pathway-dependent sensing of mitochondrial DNA mediates ocular surface inflammation（Signal Transduction and Targeted Therapy，IF=39.3，厦门大学附属厦门眼科中心）

十一、订购信息

• 规格与报价：定制服务按目的基因或片段长度、调控方式、载体元件、滴度规格与总量核算，价格以最终确认的方案为准。
• 周期与运输：交付周期以合同约定为准，不含运输时间，干冰运输；慢病毒现货可缩短到货周期。
• 询价时请提供：目的基因名称或序列 / Gene ID 或 NM 号；调控方式（过表达、干扰、cas9/gRNA）；所选载体编号或荧光标记、筛选抗性、启动子要求；所需滴度与总量；靶细胞类型及是否用于动物实验。

如需报价、货期与载体方案确认，请通过页面「索取报价 / 购买咨询」提交需求，并注明上述信息；方案确定后再进入合成与交付流程。

合规声明：本产品仅供科研实验使用，不可用于临床诊断或治疗。病毒感染效率及目的基因表达 / 干扰效果受细胞类型、MOI 与实验条件影响，需结合预实验评估；慢病毒操作请遵循所在机构的生物安全规范。