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- 上海羽朵生物
- YDS0366
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
10mg
| 有效期 | 5年 |
|---|---|
| 溶解性 | 10 mg/mL in water |
| 来源 | From horseradish |
| 英文名称 | Peroxidase(POD) |
| CAS | 9003-99-0 |
| 储存条件 | -20℃ |
| 酶活/效价 | 233-300units/mg solid |
| 外观（性状） | 褐色结晶性冻干粉状 |
| 单位 | 瓶 |
根据HRP的催化特性，ELISA中一般使用过氧化氢(H2O2)作为HRP底物之一，在供氢体(即色原底物)存在时，HRP与H2O2的反应迅速而又专一。由图4可见，HRP被H2O2二价地氧化形成复合物I，而复合物I又可与氢供体的二步连续的单价相互作用而还原至起始状态。复合物Ⅱ是被氧化的带一个电子的中间产物，当H2O2过量，由于复合物Ⅲ或Ⅳ的形成，酶活性受抑制(以后补上)。30％的H2O2并不稳定。由于H2O2既为HRP的底物，也为其抑制剂，因而ELISA要想得到满意的测定结果，H2O2必须限定在一定的浓度范围内，终浓度通常为2～6 mmol/L。然而在实际研究工作中，一般很少注意这一点。大多数研究者所使用的H2O2的浓度常较理想反应所需的量大2～4倍。吸附于固相的HRP较游离的HRP更易受过量H2O2的抑制。如果30％H2O2贮存液浓度经测定证实确为30％，则稀释10 000—12 000倍常是较为理想的底物。H2O2的摩尔消光系数为10mm光径240nm波长下为43.6，因此，可通过这种方式来检测H2O2工作溶液的浓度。
固相ELISA中，当温度高于20oC时，HRP活性常较低，在底物溶液中加入非离子去垢剂聚山梨醇-20或TritonX-100可延迟HRP的失活，且可使反应温度加大，但非离子去垢剂的这种酶活性保护效应依氢供体的不同而有差异。如以2,2’-联氮-双-[3-乙-基苯并噻唑啉]-6-磺酸(ABTS)为氢供体，则只能保护20％的酶活性，而以邻联茴香胺(ODA)为氢供体时，酶活性的保护提高至90％。
HRP之所以是迄今为止在ELISA中应用最为广泛的标记用酶，主要是因为其一方面易于提取，价格相对低廉；另一方面性质稳定，耐热及有机溶剂的作用，与抗原或抗体偶联后，活性很少受损失。
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文献和实验辣根过氧化物酶 horseradish peroxidase
缩写为FRP．为过氧化物酶之一种，含于辣根（ horseradish）中。 1941年 F· Thcorell曾提取其结晶。将之吸入细胞或注入之后，以 3， 3′ -二氨基联苯（ 3， 3′－ diaminobenzidine）为底物进行作用时，在光学或电子显微镜下可以看到一定的标记。最早为 W． Straus（ 1959）曾用以鉴别吞噬小体 Ph-agosome． K． Kristensson和 G． Olsson，（ 1974）在对利用轴突内逆行运输的神经元、轴突分支的着染，并而用于
2 O A 一般在植物界中广泛存在，但在动物组织中存在的知道的不多。动物组织的过氧化物酶反应是由血红蛋白附属的过氧化物酶作用而来的。对辣根（ Armoracialapathifolia）中的这种酶了解得较多， H． Theorell（ 1941）已将其结晶而提纯出来。分子量约 4万 4千，一分子含一个作用基氯高铁血红素。此酶的吸收光谱在 640、 500、 402毫微米处为最大吸收。加入 H2 O2 （或 CH3 OOH）时可见到吸收光谱的变化。这是由于过氧化氢和酶的氯
一、原理AsA-POD催化AsA与H2O2反应，使AsA氧化成单脱氢抗坏血酸（MDAsA）。随着AsA被氧化，溶液中290nm波长下的消光值（A290）下降，根据单位时间内A290减少值，计算AsA-POD活性。AsA氧化量按消光系数2.8（mmol/L）/cm计算，酶活性可用每克鲜重每小时氧化AsA的微摩尔数μMol/g·H表示。二、仪器离心机；紫外分光光度计；研钵；试管。三、试剂50mmol/L K2PO4－KH2PO4缓冲液（PH7.0，内含0.1mmol/L EDTA-Na2）
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