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H9细胞
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干细胞
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无
CQL008
传秋生物
500
H9
良好
5年
干冰
人
否
贴壁
T25
细胞系使用说明书
细胞名称
H9胚胎干细胞
种属
细胞来源
上海市东方医院
生长特性
贴壁 球形克隆
培养条件
培养基:STEMCELL的mTSR1,人胚胎干细胞无饲养层培养基
温度:37℃ 气相:95%空气,5% CO2
传代
1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代,每次传代48h后一天换一次;
2.待细胞克隆还没开始融合时,需要对其进行传代,传代比例为1:4;
3传代步骤:将1 mg/mL胶原酶IV消化液置于37°预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加2 ml预热好的胶原酶,置于37°孵育消化(第一次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间,记录最佳消化时间,以便于下次消化,前30min观察一次,之后每15min观察一次)一般孵育30-60min左右,消化好后加入5ml完全培养基。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬液,置于15ml离心管中,待细胞自然沉降后将上层Collagenase-type IV吸除,加入hES完全培养液5 ml,吹打2-3次,待细胞自然沉降后将上层培养液吸除。再加入培养液重悬细胞传代。每次传代后48h内不要移动。
保存
冻存条件:60%完全培养基+30%FBS(ES级)+10%DMSO
(备注:建议使用本公司的冷冻液(H-W-100),用4度保存的冷冻液直接重悬细胞,不能预热后使用。)
保存条件:液氮存储
供应限制
仅供研究之用
常见问题及解决方案
1.培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。
2.细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留8-10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。
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