- ¥360 - 1530
- geltinsa
- JLC-G023
- 国内
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
99
- 英文名：
ArcticExpress (DE3) pRARE2 Chemically Competent Cell
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海机纯实业有限公司
- 保存条件：
低温保存
- 规格：
10×100ul/50×100ul
| 规格： | 10×100ul | 产品价格： | ¥360.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 50×100ul | 产品价格： | ¥1530.0 |
ArcticExpress (DE3) pRARE2 Chemically Competent Cell
产品货号： JLC-G023
保存条件： -80℃
产品规格 : 10×100μl 50×100μl
产品介绍 :
基因型 :
E.coli B F– ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR] pRARE2 (CamR)
简单说明 :
ArcticExpress (DE3) pRARE2来源于ArcticExpress (DE3)，将具有氯霉素抗性的pRARE2质粒导入ArcticExpress (DE3)细胞中即是ArcticExpress (DE3) pRARE2。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株染色体DNA中整合了λ噬菌体DE3区，使得ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株可同时表达T7 RNA聚合酶和
大肠杆菌RNA聚合酶，广泛用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。
ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株具有四环素，庆大霉素，氯霉素抗性，endA1突变有利于质粒DNA的稳定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使ArcticExpress (DE3) pRARE2可以表达适应低温的伴侣蛋白Cpn10和Cpn60（来自嗜冷菌—Oleispira antarctica）。
Cpn10和Cpn60伴侣蛋白在4-12℃表现出较高活性，在ArcticExpress(DE3) pRARE2细胞中表达时，可降低重组蛋白包涵体的形成，增加可溶重组蛋白的表达量及生物活性，比传统的原核表达伴侣蛋白GroEL、GroES等具有更加优异的促融能力。同时，pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平。ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达108cfu/μg DNA。
操作说明 :
1. ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒，并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上（（平板中务必同时含有34ug/ml的氯霉素，40ug/ml的庆大霉素和转化质粒本身的筛选抗生素；若质粒浓度较高，也可稀释后涂板，务必保证能在平板上挑到单克隆菌落）。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项 :
1. 感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株携带 pRARE2质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素、40ug/ml的庆大霉素，以防质粒丢失。
3. 为获得需要量的蛋白，佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
4. ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞具有四环素、庆大霉素、氯霉素抗性，不可用于具有四环素、庆大霉素、氯霉素抗性质粒的转化。
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文献和实验摘要： 本文主要介绍了各种感受态细胞的区别、用途和特征. Xl1-Blue菌株 基因型： endA1 gyrA96（nalR） thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F'[Tn10 proAB+ lacIq Δ（lacZ）M15] hsdR17（rK- mK+）.
菌等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出，而后者细胞内本就没有甲基化酶，从这些细胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。 E.coli JM110 要排除dam,dcm甲基化的影响，需要用特定的dam-,dcm-的菌株，如JM110 如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒，则不会被甲基化. 各种感受态细胞的区别 用途 特征
【专题讨论】原核表达秘笈之宿主菌株的选择！（接原原核表达研究者关心的10个问题贴）
的生产任务”——因为很难亲眼观察微观世界中表达是如何进行的，当出现问题时，我们需要经验判断问题所在。宿主细胞对原核表达可能会产生哪些影响呢？ 知其然还要知其所以然。比如，菌株内源的蛋白酶过多，可能会造成外源表达产物的不稳定，所以一些蛋白酶缺陷型菌株往往成为理想的起始表达菌株。堪称经典的BL21系列就是lon和ompT蛋白酶缺陷型，也是我们非常熟悉的表达菌株。大名鼎鼎的BL21(DE3)融源菌则是添加T7聚合酶基因，为T7表达系统而设计。 真核细胞偏爱的密码子和原核系统有不同，因此，在用原核系统
