- ¥340 - 1440
- geltinsa
- JLC-G098
- 国内
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
70
- 英文名：
BJ5183-AD-1Chemically Competent Cell
- 保质期：
12个月
- 供应商：
江西江蓝纯生物试剂有限公司
- 保存条件：
避光保存
- 规格：
10×100ul/50×100ul
| 规格： | 10×100ul | 产品价格： | ¥340.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 50×100ul | 产品价格： | ¥1440.0 |
BJ5183-AD-1Chemically Competent Cell
产品货号： JLC-G098
保存条件： -80℃
产品规格：10×100μl 50×100μl
产品介绍：
基因型 :
endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (Strr) [pAdEasy-1 (Ampr)]
简单说明 :
BJ5183-AD-1是携带了腺病毒质粒pAdeasy-1的BJ5183菌株。BJ5183菌株是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株，是目前腺病毒系统常用的感受态细胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC双重突变，赋予BJ5183细胞较强的重组能力，有利于转入的目的基因与腺病毒骨架质粒的重组。endA1（缺失核酸内切酶）的突变有利于重组DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。BJ5183-AD-1菌株细胞中已经提前转入了腺病毒质粒pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]，赋予该菌株氨苄抗性，在病毒质粒构建时，只需转入线性化的目的质粒即可，简化了实验步骤，提高了病毒质粒重组概率。Strr赋予BJ5183-AD-1菌株链霉素抗性。-BJ5183-AD-1感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒(size:1163bp)检测转化效率>1×105 cfu/μg DNA。
操作说明 :
1. BJ5183-AD-1感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒（含有目标基因并线性化），并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项 :
1. 感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入目的DNA时应轻柔操作。
3. BJ5183-AD-1菌株的质粒产量不高。腺病毒构建成功后，可选择在其他大肠杆菌菌株中扩繁，纯化质粒。
4. BJ5183-AD-1感受态细胞对温度敏感，应储存在-80℃超低温冰箱，避免温度波动，温度波动会降低感受态转化效率。
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文献和实验Generation of Recombinant Adenovirus Using the Escherichia coli BJ5183 Recombination System
here uses homologous recombination machinery of Escherichia coli BJ5183 to construct plasmids used in generation of adenoviral vectors. With this method, no ligation steps are involved in generating the plasmids, and any region of the adenoviral genome
Construction and Characterization of Adenovirus Vectors
2006 ). Suspend the DNA in a total volume of 25 µL of 0.1X TE-Ad. 12. Repeat Steps 5-10 with 5 µL of DNA (from Step 11) and 100 µL of DH5 cells, rather than BJ5183. 13. Select two colonies from each plate. Purify the DNA
Construction and Characterization of Adenovirus Vectors
2006 ). Suspend the DNA in a total volume of 25 µL of 0.1X TE-Ad. 12. Repeat Steps 5-10 with 5 µL of DNA (from Step 11) and 100 µL of DH5 cells, rather than BJ5183. 13. Select two colonies from each plate. Purify the DNA
