- ¥240 - 1020
- geltinsa
- JLC-G006
- 国内
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
20
- 英文名：
DH10Bac感受态细胞
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海机纯实业有限公司
- 保存条件：
低温保存
- 规格：
10×100ul/50×100ul
| 规格： | 10×100ul | 产品价格： | ¥240.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 50×100ul | 产品价格： | ¥1020.0 |
DH10Bac Chemically Competent Cell
产品货号： JLC-G006
保存条件： -80℃
产品规格 : 10×100μl 50×100μl
产品介绍:
基因型 :
F- mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC) 80lacZM15 lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG /pMON14272 / pMON7124
简单说明 :
DH10Bac感受态主要用于生产重组杆状病毒分子（Bac-to-Bac杆状病毒表达系统）。DH10Bac菌株中含有父本杆粒bMON14272、辅助质粒pMON7124：父本杆粒 bMON14272包含mini-F复制子,卡那抗性基因, attTn7位点和lacZα互补因子；
辅助质粒pMON7124含有tnsABCD区（tnsABCD region supplies the transposition proteins required for insertion of the mini-Tn7 from the donor plasmid into its target site on the parent bacmid），具有四环素抗性，在细胞扩增过程中丢失，但可提高供体质粒pFastBac转化后的基因转座效率。
mcrA、mcrBC及mrr突变使DH10Bac菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA（Therefore , genomic DNA , both prokaryotic and eukaryotic, can be cloned efficiently in DH10Bac）。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。φ80dlacZ∆M15的存在使DH10Bac可用于蓝白斑筛选，High5TM系列DH10Bac感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率>108cfu/μg。
操作说明 :
1. DH10Bac感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目 的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB无菌培养液，混匀后37℃，200 rpm复苏4小时。
4. 复苏完成后，用SOC稀释转化液到（10-1，10-2），每个稀释用吸取100ul铺一个LB平板（共涂3个平板），平板包含50ug/ml Kan，7ug/ml Gentamicin，10ug/ml tetracycline，40ug/ml X-gal，40ug/ml IPTG。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱48h。
阳性验证：
1. 挑10个白色的克隆，重新划线在LB平板（50ug/ml Kan，7ug/ml Gentamicin，10ug/ml tetracycline，40ug/ml X-gal，40ug/ml IPTG）。37度过夜培养。
2. 挑选白色的克隆，转接到含有50ug/ml Kan，7ug/ml Gentamicin，7ug/ml tetracycline的LB培养液中，过夜培养。
3. 使用试剂盒抽提重组质粒DNA（＞100kb）。使用PCR法分析重组质粒是否正确重组。
注意事项 :
1. 感受态细胞在冰上融化。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少终用于涂板的菌量。
4. 涂板时务必涂干，平板表面不留任何水渍。
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文献和实验样（比如 GeneArt EX 超长版就建议用 DH10B 电转感受态细胞）。市面上有多种为满足不同需求而优化条件的商品化组装克隆试剂盒，可以根据自己的需求选出最合适自己需要的——选对合适的 Kit ，每天都是好心情，实验高歌猛进充满成就感；选不合适就只能天天 re-search 了——反反复复来来回回(re-)地摸索(search)尝试，挺折磨的。选择kit时一般留意几个参数：插入片段长度，单次反应可插入片段数量，同源序列长度——即合成引物时要求添加的载体同源序列长度，反应时间，当然还有克隆效率（几个领先品牌的产品
Mutagenesis of Viral BACs With Linear PCR Fragments (ET Recombination)
Principle steps of mutagenesis. (A) Preparation of electrocompetent bacterial cells for mutagenesis. Prior to mutagenesis the plasmid pKD46, encoding the recombination functions, is introduced into DH10B containing the viral BAC. In the next step
系列）：高拷贝会导致大片段质粒复制压力大，易丢失或断裂，优先用低拷贝载体（如 pACYC184，拷贝数 10-15）或大片段专用载体（如 BAC 载体 pBeloBAC11，可容纳 100kb 以上片段，在大肠杆菌中稳定存在）； ④选择合适的连接方法，比如 Gibson 组装（无缝克隆）的方法更适合 10-20kb 大片段的连接，相比传统的 T4 连接的方法，成功率更高，操作更简便； ⑤选择重组缺陷型感受态，提高大质粒的转化效率，如 Stbl3、DH10B 等，此外转化方式也会影响转化
