BL21 Star(DE3) 感受态细胞100ul*50

产品名称：BL21 Star(DE3) 感受态细胞100ul*50
规格：100ul*50
分类：表达感受态细胞
保存条件（保质期）：   -80℃（6个月）

BL21 Star(DE3) 感受态细胞100ul*50培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
BL21 Star(DE3) 感受态细胞100ul*50注意事项：
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。--
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3.  当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。 
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个 数量级。 --
6. 对于连接产物转化，转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm)  避免用
力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
BL21 Star(DE3) 感受态细胞100ul*50操作说明：
1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使乙醇充分挥发，
待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 XL1-Blue 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 --
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19；   --
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 T 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA 浓度 不超过 100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态。--
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖--。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推 荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。--
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后，转移到 50ml 离心管（BD Falcon50ml 锥形离心管等），向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。--
6. 5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大，若全部涂板 请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。
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盐酸水苏碱 HPLC≥98% 20mg HumanVitaminB6，VB6ELISAKit人维生素B6(VB6)ELISA试剂盒规格：96T/48T
盐酸甜菜碱 HPLC≥98% 20mg HumanVitaminC，VCELISAKit人维生素C(VC)ELISA试剂盒规格：96T/48T
盐酸吐根酚碱 HPLC≥98% 10mg HumanVitaminD，VDELISAKit人维生素D(VD)ELISA试剂盒规格：96T/48T
盐酸拓扑替康 HPLC≥98% 20mg HumanVitaminD2，VD2ELISAKit人维生素D2(VD2)ELISA试剂盒规格：96T/48T
盐酸小檗胺 HPLC≥98% 20mg HumanVitaminD3，VD3ELISAKit人维生素D3(VD3)ELISA试剂盒规格：96T/48T
盐酸小檗碱 HPLC≥98% 20mg HumanVitaminDReceptor,VDRELISAKit人维生素D受体(VDR)ELISA试剂盒规格：96T/48T
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BL21 Star(DE3) 感受态细胞100ul*50Humanvionectin,V人玻连蛋白/体外粘连蛋白(VN/CD51+CD61)ELISA试剂盒规格：96T/48T 盐酸石蒜碱 HPLC≥98% 20mg
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