BW25113 感受态细胞100ul*50

同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？
答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
产品描述：

产品名称	包装	分类
BW25113 感受态细胞100ul*50	100ul*50	克隆感受态细胞

BW25113 感受态细胞100ul*50注意事项：
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
大鼠小肠隐窝上皮细胞;IEC-6 巨核细胞白血病细胞，Dami细胞 NR8383细胞，大鼠肺泡巨噬细胞胰岛素样生长因子I（57-70）Insulin-like Growth Factor I (57-70)质量规格：>95%,BR
HEC-1A, 人子宫内膜癌细胞系 Human胰岛素样生长因子Ⅱ（69-84）Insulin-Like Growth Factor II(69-84)质量规格：>95%,BR
CDH5 Others Human 人 CDH5 / Cadherin-5 / CD144 人细胞裂解液 (阳性对照) 白介素-1β转化酶底物Interleukin-1β Convertase Substrate质量规格：>95%,BR
支气管上皮细胞培养基BEpiCM-prf下钙素Katacalcin质量规格：>95%,BR
LYVE1 Others Mouse 小鼠 LYVE1 / LYVE-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 肯普肽Kemptide质量规格：>95%,BR
RLE-6TN细胞，大鼠肺上皮Ⅱ型细胞 PC-3(人前列腺癌细胞) 大鼠肝细胞;BRL 3A别隐品碱;A-别隐品碱(标准品) Allocryptopine 质量规格：HPLC≥98%,标准品
EFNB2 Protein Rat 重组大鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 标签)LGD-4033 LGD4033 质量规格：>98%,BR
16HBE(人支气管上皮样细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞;SH35-溴嘧啶5-Bromopyrimidine 质量规格：>98%
人喉癌上皮细胞;Hep-2阿螺旋霉素17-DMAG质量规格：HSP90 抑制剂，进分
LIF Others Mouse 小鼠 LIF 人细胞裂解液 (阳性对照) 大豆异黄酮Soybean isoflavones质量规格：染料木素17%-20%,异黄酮含量在40-50%
野鸦椿素B HPLC≥95% 20mg RatInhibin,INH-AELISA试剂盒大鼠抑制素A(INH-A)ELISA试剂盒规格：96T/48T
氧代甘遂,二烯酸 HPLC≥95% 20mg RatinhibinB,INH-BELISAKit大鼠抑制素B(INH-B)ELISA试剂盒规格：96T/48T
克罗酰胺 HPLC≥98% 20mg RatinhibinB,INH-BELISA试剂盒大鼠抑制素B(INH-B)ELISA试剂盒规格：96T/48T
野甘草酸 HPLC≥95% 20mg RatInhibinbindingprotein,INHBPELISAKit大鼠抑制素结合蛋白(INHBP)ELISA试剂盒规格：96T/48T
N对香豆酰真蛸胺 HPLC≥95% 20mg RatInhibinbindingprotein,INHBPELISA试剂盒大鼠抑制素结合蛋白(INHBP)ELISA试剂盒规格：96T/48T
N阿魏酰真蛸胺; N 阿魏酰章鱼胺 HPLC≥95% 20mg RatinhibitorysubunitofNF-κBα,IKBαELISAKit大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA试剂盒规格：96T/48T
早熟素Ⅱ HPLC≥95% 20mg RatinhibitorysubunitofNF-κBα,IKBαELISA试剂盒大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA试剂盒规格：96T/48T
鸭脚木碱 HPLC≥95% 20mg RatInsulieceptorβ,ISR-βELISAKit大鼠胰岛素受体β(ISR-β)ELISA试剂盒规格：96T/48T
乌沙苷元洋地黄苷 HPLC≥95% 20mg RatInsulieceptorβ,ISR-βELISA试剂盒大鼠胰岛素受体β(ISR-β)ELISA试剂盒规格：96T/48T
植酮 HPLC≥98% 20mg RatInsulin,INSELISAKit大鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒规格：96T/48T
BW25113 感受态细胞100ul*50RatInhibin,INH-A大鼠抑制素A(INH-A)ELISA试剂盒规格：96T/48T 异地黄苷 HPLC≥95% 20mg
RatInhibin,INH-AELISA试剂盒大鼠抑制素A(INH-A)ELISA试剂盒规格：96T/48T 野鸦椿素B HPLC≥95% 20mg
RatinhibinB,INH-B大鼠抑制素B(INH-B)ELISA试剂盒规格：96T/48T 氧代甘遂,二烯酸 HPLC≥95% 20mg
RatinhibinB,INH-BELISA试剂盒大鼠抑制素B(INH-B)ELISA试剂盒规格：96T/48T 克罗酰胺 HPLC≥98% 20mg
RatInhibinbindingprotein,INHBP大鼠抑制素结合蛋白(INHBP)ELISA试剂盒规格：96T/48T 野甘草酸 HPLC≥95% 20mg
RatInhibinbindingprotein,INHBPELISA试剂盒大鼠抑制素结合蛋白(INHBP)ELISA试剂盒规格：96T/48T N对香豆酰真蛸胺 HPLC≥95% 20mg
RatinhibitorysubunitofNF-κBα,IKBα大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA试剂盒规格：96T/48T N阿魏酰真蛸胺; N 阿魏酰章鱼胺 HPLC≥95% 20mg
RatinhibitorysubunitofNF-κBα,IKBαELISA试剂盒大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA试剂盒规格：96T/48T 早熟素Ⅱ HPLC≥95% 20mg
RatInsulieceptorβ,ISR-β大鼠胰岛素受体β(ISR-β)ELISA试剂盒规格：96T/48T 鸭脚木碱 HPLC≥95% 20mg
RatInsulieceptorβ,ISR-βELISA试剂盒大鼠胰岛素受体β(ISR-β)ELISA试剂盒规格：96T/48T 乌沙苷元洋地黄苷 HPLC≥95% 20mg
BW25113 感受态细胞100ul*50操作方法：
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？
答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。