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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
47
- 英文名:
XL10-Gold 感受态细胞
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
100ul*10
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
产品名称:XL10-Gold 感受态细胞100ul*10
规格:100ul*10
分类:克隆感受态细胞
保存条件(保质期): -80℃(6个月)
XL10-Gold 感受态细胞100ul*10注意事项:
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。--
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡,气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐,乙醇,蛋白及缓冲液等污染时,转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导,增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率,推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍,转化效率下降一个 数量级。 --
6. 对于连接产物转化,转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物,保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率,增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作,吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用
力过猛,以免剪切力过大损伤细胞膜,降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞保存在-80℃以下,高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
人非小细胞肺腺癌细胞;NCI-H2087芸香柚皮苷(标准品)Narirutin质量规格:HPLC≥98%,标准品
CXCL16 Others Mouse 小鼠 CXCL16 / SRPSOX 人细胞裂解液 (阳性对照) 泽泻醇B醋酸酯(标准品)Alisol B 23-acetate质量规格:HPLC≥98%,标准品
猪胚胎传代细胞;ST獐牙菜苷(标准品)Sweroside质量规格:HPLC≥98%,标准品
SELPLG Others Mouse 小鼠 PSGL-1 / CD162 / SELPLG 人细胞裂解液 (阳性对照) 獐牙菜苦苷(标准品)Swertiamarin质量规格:HPLC≥98%,标准品
Huh-7 人肝癌细胞樟脑(标准品)Camphor质量规格:HPLC≥96%,标准品
HIC(人小肠癌细胞) 5×106cells/瓶×2胆酸Cholic acid质量规格:≥98%,BR,无水
ACE2 Others Human 人 ACE2 / ACEH 人细胞裂解液 (阳性对照) 胆酸(标准品)Cholic acid质量规格:HPLC≥98%,标准品
人口腔角质细胞HOK党参炔苷(标准品)Lobetyolin质量规格:仅供鉴别用
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/England/195/2009) HA 人细胞裂解液 (阳性对照) α-倒捻子素(标准品)α-mangostin质量规格:HPLC≥98%,标准品
KMB17 人胚肺成纤维细胞地奥司明(标准品)Diosimin质量规格:HPLC≥98%,标准品
泽泻醇 HPLC≥98% 5mg Rat dopamine D2 receptor (D2R) ELISA Kit 大鼠多巴胺D2受体(D2R)ELISA试剂盒
毡毛美洲茶素 HPLC≥98% 5mg Rat endocrine gland vascular endothelial growth factor (EG-VEGF) ELISA Kit 大鼠内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)ELISA试剂盒
粘毛黄芩素 III 四乙酸酯 HPLC≥98% 5mg Rat endostatin (ES) ELISA Kit 大鼠内皮抑素(ES)ELISA试剂盒
粘毛黄芩素III HPLC≥98% 5mg Rat endothelial lipase (EL) ELISA Kit 大鼠内皮脂肪酶(EL)ELISA试剂盒
樟叶木防己碱 HPLC≥98% 5mg Rat endothelial niic oxide syhase (eNOS) ELISA Kit 大鼠内皮型合成酶(eNOS)ELISA试剂盒
柘树口山酮 A HPLC≥98% 5mg Rat endothelial niic oxide syhase 3 (eNOS-3) ELISA Kit 大鼠内皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒
栀子醛 HPLC≥98% 5mg Rat endothelin 1 (ET-1) ELISA Kit 大鼠内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒
珠子草素 HPLC≥98% 5mg Rat endotoxin (ET) ELISA Kit 大鼠内毒素(ET)ELISA试剂盒
梓苷,梓实糖苷 HPLC≥98% 5mg Rat erythropoietin (EPO) ELISA Kit 大鼠红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒
梓木内酯 HPLC≥98% 5mg Rat factor related apoptosis inducing ligand (FASL) ELISA Kit 大鼠凋亡相关因子配体(FASL)ELISA试剂盒
XL10-Gold 感受态细胞100ul*10Rat dopamine D1 receptor (D1R) ELISA Kit 大鼠多巴胺D1受体(D1R)ELISA试剂盒 云南红豆杉酯甲 HPLC≥98% 5mg
Rat dopamine D2 receptor (D2R) ELISA Kit 大鼠多巴胺D2受体(D2R)ELISA试剂盒 泽泻醇 HPLC≥98% 5mg
Rat endocrine gland vascular endothelial growth factor (EG-VEGF) ELISA Kit 大鼠内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)ELISA试剂盒 毡毛美洲茶素 HPLC≥98% 5mg
Rat endostatin (ES) ELISA Kit 大鼠内皮抑素(ES)ELISA试剂盒 粘毛黄芩素 III 四乙酸酯 HPLC≥98% 5mg
Rat endothelial lipase (EL) ELISA Kit 大鼠内皮脂肪酶(EL)ELISA试剂盒 粘毛黄芩素III HPLC≥98% 5mg
Rat endothelial niic oxide syhase (eNOS) ELISA Kit 大鼠内皮型合成酶(eNOS)ELISA试剂盒 樟叶木防己碱 HPLC≥98% 5mg
Rat endothelial niic oxide syhase 3 (eNOS-3) ELISA Kit 大鼠内皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒 柘树口山酮 A HPLC≥98% 5mg
Rat endothelin 1 (ET-1) ELISA Kit 大鼠内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒 栀子醛 HPLC≥98% 5mg
Rat endotoxin (ET) ELISA Kit 大鼠内毒素(ET)ELISA试剂盒 珠子草素 HPLC≥98% 5mg
Rat erythropoietin (EPO) ELISA Kit 大鼠红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒 梓苷,梓实糖苷 HPLC≥98% 5mg
XL10-Gold 感受态细胞100ul*10操作说明:
待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖,冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 XL1-Blue 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟,待其融化,加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手EP 管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。 --
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19; --
B. 对于连接产物,请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 T 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬,DNA 浓度 不超过 100ng/μl,体积不超过 5μl/50μl 感受态。--
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖--。
4. 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数,也可按所用电转仪推 荐的参数操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。--
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯,放室温,加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基(室温),用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后,转移到 50ml 离心管(BD Falcon50ml 锥形离心管等),向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。 37℃,225 rpm 复苏 60 分钟。--
6. 5000rpm 离心一分钟收菌,重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上(因菌量较大,若全部涂板 请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个)。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。
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文献和实验Preparing Colloidal Gold for Electron Microscopy
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免疫金银染色(immuno gold silver staining,IGSS)
免疫金银染色(immunogoldsilverstaining,IGSS)是在金免疫技术基础上发展起来的更为敏感的技术,由Holgate在1983年首先建立成功。 一、原理 金免疫技术测定的产物上的金颗粒可将银离子还原成银颗粒,在金颗粒表面形成一色泽更深的黑色层,因而增强了金免疫技术的敏感性(图19-3)。 图19-3 免疫金银染色原理示意图 二、方法
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