- ￥1080
- LSM Bio
- 进口
- PVT6302
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20摄氏度
- 保质期：
3个月
- 英文名：
PX334
- 库存：
100
- 供应商：
LSMBIO
- 规格：
2ug
PX334
Search name
PX334,Plasmid PX334,PX334 vector
PX334 Informaiton
Carrier name: PX334 or PX334-U6-DR-BB-DR-Cbh-NLS-hSpCas9n (D10A) -NLS-H1-shorttracr-PGK-puro
Plasmid type: CRISPR-Cas9 vector; gene knockout carrier; mammalian carrier
High copy / low copy: high copy
Insertion site: restrictive endonuclease, polyclonal site
Promoter: U6
Carrier size: 10151bp
5'sequencing primers and sequences: LKO.1 5':GACTATCATATGCTTACCGT
3'sequencing primers and sequences: BGH Reverse:TAGAAGGCACAGTCGAGG
Carrier labels: HA, NLS, SV40NLS (N TER)
Vector resistance: ampicillin
Screening markers: Puromycin
Cloned strain: Stbl3
Host cell (line): conventional mammalian cells, etc.
Remark: humanized S. pyogenes Cas9 (D10A) nickase; This plasmid separately encodes a, encodes, the second part of the system.
Stability: stable expression
Composition / inducible type: composition
Virus / non virus: non virus
Use:CRISPR-CAS11-sgRNA plasmid
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文献和实验CRISPR/Cas9 是一种强大的基因组编辑工具，今天我们介绍 CRISPR/Cas9 系统操作。以下操作说明是基于作者冰糖个人实验室操作，仅供参考。 质粒介绍我们使用的是 Feng Zhang 实验室的系统的 pX330 质粒，如下图所示： 酶切系统 37 ℃, 3 hr；Run 1% gel，回收。Elute 到 50 mL H2O。我们利用 BbsI 消化载体形成粘末端，以利于下游 oligo 退火产物的连接；酶切时请充分，且绝对不能加 CIP 处理
和 sgRNA 用慢病毒或者质粒进行转染、或者直接注射 DNA/RNA，甚至直接转染蛋白复合体等。 Cas9 蛋白就能靶向感兴趣的基因座，并产生双链切口 (DSBs)，然后切口会被细胞本身的修复机制所修复。 非同源末端连接修复 (NHEJ) 就是其中一种，而 NHEJ 是一种易错修复途径，通常会引起少量插入或者缺失突变，开放阅读框 (ORF) 就会被破坏，这个基因就被灭活了。 同源重组修复 (HDR)，通过在 Cas9-sgRNA 组分中加入一个供体 DNA，供体 DNA
260 基因敲除质粒 Amp PX334 基因敲除质粒 Amp http://www.addgene.org/42333/ PX458 基因敲除质粒 Amp PX459 基因敲除质粒
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