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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
负20摄氏度
- 保质期:
3个月
- 英文名:
PX459
- 库存:
100
- 供应商:
LSMBIO
- 规格:
2ug
PX459
Search name
PX459,Plasmid PX459,PX459 vector
PX459 Plasmid informaiton
The name of the carrier: PX459; pSpCas9 (BB) -2A-Puro
Plasmid type: CRISPR/Cas9 vector; gene knockout carrier
High copy / low copy: low copy
Cloning method: AgeI, EcoRI
Promoter: Cbh
Carrier size: 9175 BP
5'sequencing primers and sequences: TTTATGGCGAGGCGGCGG
3'sequencing primers and sequences: --
Carrier label: 3XFLAG (N end), 2A-Puro (C end)
Vector resistance: ampicillin (Ampicilin)
Screening markers: Puromycin
Cloned strain: Stbl3
Host cell (line): mammalian cell line
Note: -
Stability: stable expression
Constitutive and inducible type
Virus / non virus: non virus
Use:CRISPR-CAS14-sgRNA plasmid
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文献和实验手把手教你利用 CRISPR-Cas9 系统精准敲除靶标基因
2 Cas9 - 2 hitKO 系统三、Cas9 - 2 hitKO 系统中涉及到的载体为了达到高效的敲除效率,我们在同一个载体重引入 cas9 酶和两个向导性 RNA。整个系统包括 3 个载体: PX458M ,PX459M 和 EZ-GuideXH。PX458M ,PX459M 除了含有 Cas9 和一个向导性 RNA 插入位点,还引入第二个向导性 RNA 插入位点。EZ-GuideXH 是为插入第二个向导性 RNA 的辅助性载体。PX458M 带有 EGFP 荧光标记; PX459M 带有
CRISPR/Cas9 是一种强大的基因组编辑工具,今天我们介绍 CRISPR/Cas9 系统操作。以下操作说明是基于作者冰糖个人实验室操作,仅供参考。 质粒介绍我们使用的是 Feng Zhang 实验室的系统的 pX330 质粒,如下图所示: 酶切系统 37 ℃, 3 hr;Run 1% gel,回收。Elute 到 50 mL H2O。我们利用 BbsI 消化载体形成粘末端,以利于下游 oligo 退火产物的连接;酶切时请充分,且绝对不能加 CIP 处理
和 sgRNA 用慢病毒或者质粒进行转染、或者直接注射 DNA/RNA,甚至直接转染蛋白复合体等。 Cas9 蛋白就能靶向感兴趣的基因座,并产生双链切口 (DSBs),然后切口会被细胞本身的修复机制所修复。 非同源末端连接修复 (NHEJ) 就是其中一种,而 NHEJ 是一种易错修复途径,通常会引起少量插入或者缺失突变,开放阅读框 (ORF) 就会被破坏,这个基因就被灭活了。 同源重组修复 (HDR),通过在 Cas9-sgRNA 组分中加入一个供体 DNA,供体 DNA
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