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- 2026年03月31日
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产品图片说明：原核表达 Ni-NTA纯化
大肠杆菌ArcticExpress表达系统简介
ArcticExpress (DE3)来源于E. coli，endA1突变型、Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株，有效提高质粒和表达蛋白的稳定性，适用于pET、pGEX，pMAL等蛋白表达载体。由于整合了嗜冷菌Oleispira antarctica [cpn10cpn60 GentR]基因，可表达低温仍具有活性的Cpn10和Cpn60伴侣蛋白，增加可溶重组蛋白的表达量及生物活性，与传统的原核伴侣蛋白GroEL、GroES等相比，具有更高的促溶能力。pWJ载体是我们自主构建的高效载体，使得可溶性蛋白表达量高达50-800mg/L，纯度>85%。同时该载体与ArcticExpress (DE3)配合使用，可在11℃有效表达目的蛋白，尤其适用于生物活性要求高的蛋白和酶表达。
原核表达案例
本案例基于原核表达 体系，通过RNA提取RT-PCR获得目标基因序列（未进行密码子优化），Gilson Assemble构建pWJ-目标蛋白-HIS表达载体，转化大肠杆菌表达，SDS-PAGE检测蛋白表达，确认表达后进 行扩大培养，Ni-NTA纯化获得蛋白。案例调研：客户耗时5年，换用不同菌株、不同温度、不同诱导剂浓度始终检测不到原核蛋白 表达，客户需要具有生物活性的蛋白用于结晶和共结晶实验。该蛋白为人源蛋白，自然状态下为分泌型表达，688个氨基酸，74.3kD，含有3对二硫键，稀有密码子较多；蛋白高级结构含有复杂的Q环等。
表达方案设计：通过对目标序列进行完整的分析后，决定使用蛋白自身的全部核酸序列和信号肽序列，无需密码子优化，使用我们自行设计的pWJ，构建C端HIS表达载体，低温表达，同时使用我们自行优化的培养基配方，过夜表达。
表达鉴定：表达1ml小样，离心收集菌体后重悬于1ml PBS中，吸取6μl菌液与6μl 2× loading buffer混合，95℃水浴5min，12%SDS-PAGE分析。下图中间泳道箭头指示处为目标蛋白表达，左侧泳道为未诱导的菌液显示无表达。
服务特色
蛋白表达条件优化、表达蛋白的生物活性保证及其它特殊需求（如标签去除、内毒素去除等）。可提供原核和哺乳表达系统，根据实验需求，可选用不同标签His,Trx，GST,SUMO等以满足实验需求。
能够保证蛋白具有生物学活性。
注意事项
1. 蛋白为液体冷冻状态运输，避免反复冻融；保存浓度>1mg/mL。2. 推荐-80℃保存，特殊说明除外。
3. 哺乳表达系统适用于10kD-120kD的蛋白；<10kD蛋白，可添加Fc等标签融合表达；>120kD的蛋白，昆虫表达系统具有一定优势。
4. 适用于分泌蛋白和膜蛋白的胞外段。
5. 如需使用pcDNA系列质粒，推荐使用293T细胞。
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文献和实验（细菌内同源重组AdEasy System）一、目的基因的克隆（以pshuttle-CMV质粒为例）步骤1、选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。2、重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。3、重组质粒扩增，纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。4、用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒，电泳鉴定质粒完全被切开。5、胶回收线性化质粒，以备共转化使用。二、共转化 1、大肠杆菌BJ5183电转感受态制备 （1）从新鲜琼脂板上挑取单个BJ5183细菌，接种于LB
高手进行补充 pET，原核表达金标准(转) pET 载体中，目标基因克隆到 T7 噬菌体强转录 和翻译信号控制之下，并通过在宿主细胞提供 T7 RNA 聚合酶来诱导表达。 Novagen 的 pET 系统不断扩大，提供了用于表达的新技术和选择，目前共包括 36 种载体类型、 15 种不同宿主菌和设计用于有效检测和纯化目标蛋白的许多其它相关产品。 优点 · 是原核蛋白表达 引用最多的系统 · 在任何大肠杆菌 表达系统中，基础
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