超快速纯化至多750 µg转染级纯质粒或柯斯质粒DNA
- 少于60分钟制备时间
- 无需离心即可澄清裂解液并进行异丙醇沉淀
- 在沉淀过程中不会损失DNA
- 可纯化至多750 µg高拷贝质粒DNA
- 使用LyseBlue,获得最佳的裂解效果和最大的DNA产量
HiSpeed Plasmid Kits使用阴离子交换技术,超快速、大规模纯化得到质粒DNA,无需离心。得到的DNA相当于两次CsCl梯度离心处理得到的纯度,适合转染级纯度的应用。
QIAGEN Plasmid Kit实验流程。
将中性细菌裂解物直接置于QIAfilter Cartridge内孵育,数秒内即可过滤澄清。然后将澄清的裂解物上样至阴离子交换纯化柱,在适当的低盐和pH条件下,质粒DNA会选择性地结合上去。利用中盐浓度的洗涤液去除RNA、蛋白质、代谢物及其他低分子量杂质,使用高盐缓冲液洗脱超纯的质粒DNA。利用异丙醇沉淀对DNA进行浓缩并脱盐,并通过离心收集。
QIAprecipitator模块。
独特的QIAprecipitator模块取代了纯化后用于收集异丙醇沉淀的DNA的传统离心步骤。QIAprecipitator模块可捕获沉淀的DNA,而异丙醇-缓冲液混合物则可通过。随后将DNA从QIAprecipitator洗脱至包含TE缓冲液或水的微量离心管内。离心后倒出上清液时,还会出现沉淀损失的现象,而此独特的模块则避免了沉淀损失的风险。
QIAfilter Cartridge。
QIAfilter Cartridges是特殊的过滤组件,可取代细菌细胞的碱裂解后的离心步骤。QIAfilter Cartridges可彻底去除SDS沉淀,只需较短的离心时间即可使细菌裂解液变澄清。
性能
HiSpeed Plasmid Kits提供QIAfilter Cartridges、HiSpeed Tips和QIAprecipitator模块,用于快速、大规模的制备质粒。针筒规格的QIAfilter和QIAprecipitator模块取代了传统阴离子交换过程中的离心操作,质粒纯化更加方便、快捷。可从150–250 ml的培养体积中纯化多至750 µg的高拷贝质粒DNA(培养体积取决于质粒拷贝数、插入片段大小、宿主菌和培养基)。HiSpeed Tip支持高流速,确保更快地完成DNA结合、洗涤和洗脱。
此外,HiSpeed tips中新型的阴离子交换树脂广泛用于核酸的纯化。HiSpeed Midi tips可获得多至200 µg的高拷贝质粒。其独特的分离特性使得到的DNA的纯度相当于两次氯化铯梯度离心处理得到的纯度。
原理
QIAfilter Cartridges是一种特制的过滤器,专用于取代细菌细胞碱裂解之后的离心步骤。QIAfilter Cartridges可去除SDS沉淀,只需很短的离心时间即可澄清细菌裂解液。预装的HiSpeed tips依靠重力流运行,确保不会流干,减少了质粒制备的手工操作时间。
独特的QIAprecipitator模块取代了异丙醇沉淀后传统的离心法纯化DNA。异丙醇混合液流过QIAprecipitator的时候DNA会结合上去,然后用TE缓冲液或水将DNA从QIAprecipitator洗脱下来。这一独特的模块降低了离心后转移上清液过程丢失DNA的风险。
操作流程
经中和的细菌裂解液放入QIAfilter Cartridge中,几秒内过滤澄清。滤出液放至HiSpeed tip进行质粒DNA 纯化。 洗脱所得DNA与异丙醇混合并用注射器装入QIAprecipitator中。经浓缩和脱盐后,直接从QIAprecipitator上用TE缓冲液或水洗脱DNA。
应用
HiSpeed Plasmid Kits纯化得到超纯转染级纯DNA,适合于多种应用,包括:克隆、测序、转染和质粒介导的基因沉默等。
特点 |
参数 |
Applications |
Transfection, cloning, sequencing, gene silencing |
Culture volume/starting material |
150 µl – 250 ml culture volume |
Plasmid type |
High-copy, cosmid DNA |
Processing |
Manual (filtration) |
Samples per run; throughput |
1 sample per run |
Technology |
Anion-exchange technology |
Time per run or prep per run |
|
Yield |