HiSpeed Plasmid Maxi Kit (10)

超快速纯化至多750 µg转染级纯质粒或柯斯质粒DNA

• 少于60分钟制备时间
• 无需离心即可澄清裂解液并进行异丙醇沉淀
• 在沉淀过程中不会损失DNA
• 可纯化至多750 µg高拷贝质粒DNA
• 使用LyseBlue，获得最佳的裂解效果和最大的DNA产量

HiSpeed Plasmid Kits使用阴离子交换技术，超快速、大规模纯化得到质粒DNA，无需离心。得到的DNA相当于两次CsCl梯度离心处理得到的纯度，适合转染级纯度的应用。

QIAGEN Plasmid Kit实验流程。

将中性细菌裂解物直接置于QIAfilter Cartridge内孵育，数秒内即可过滤澄清。然后将澄清的裂解物上样至阴离子交换纯化柱，在适当的低盐和pH条件下，质粒DNA会选择性地结合上去。利用中盐浓度的洗涤液去除RNA、蛋白质、代谢物及其他低分子量杂质，使用高盐缓冲液洗脱超纯的质粒DNA。利用异丙醇沉淀对DNA进行浓缩并脱盐，并通过离心收集。

QIAprecipitator模块。

独特的QIAprecipitator模块取代了纯化后用于收集异丙醇沉淀的DNA的传统离心步骤。QIAprecipitator模块可捕获沉淀的DNA，而异丙醇-缓冲液混合物则可通过。随后将DNA从QIAprecipitator洗脱至包含TE缓冲液或水的微量离心管内。离心后倒出上清液时，还会出现沉淀损失的现象，而此独特的模块则避免了沉淀损失的风险。

QIAfilter Cartridge。

QIAfilter Cartridges是特殊的过滤组件，可取代细菌细胞的碱裂解后的离心步骤。QIAfilter Cartridges可彻底去除SDS沉淀，只需较短的离心时间即可使细菌裂解液变澄清。

 

性能

HiSpeed Plasmid Kits提供QIAfilter Cartridges、HiSpeed Tips和QIAprecipitator模块，用于快速、大规模的制备质粒。针筒规格的QIAfilter和QIAprecipitator模块取代了传统阴离子交换过程中的离心操作，质粒纯化更加方便、快捷。可从150–250 ml的培养体积中纯化多至750 µg的高拷贝质粒DNA（培养体积取决于质粒拷贝数、插入片段大小、宿主菌和培养基）。HiSpeed Tip支持高流速，确保更快地完成DNA结合、洗涤和洗脱。

此外，HiSpeed tips中新型的阴离子交换树脂广泛用于核酸的纯化。HiSpeed Midi tips可获得多至200 µg的高拷贝质粒。其独特的分离特性使得到的DNA的纯度相当于两次氯化铯梯度离心处理得到的纯度。

原理

QIAfilter Cartridges是一种特制的过滤器，专用于取代细菌细胞碱裂解之后的离心步骤。QIAfilter Cartridges可去除SDS沉淀，只需很短的离心时间即可澄清细菌裂解液。预装的HiSpeed tips依靠重力流运行，确保不会流干，减少了质粒制备的手工操作时间。

独特的QIAprecipitator模块取代了异丙醇沉淀后传统的离心法纯化DNA。异丙醇混合液流过QIAprecipitator的时候DNA会结合上去，然后用TE缓冲液或水将DNA从QIAprecipitator洗脱下来。这一独特的模块降低了离心后转移上清液过程丢失DNA的风险。

操作流程

经中和的细菌裂解液放入QIAfilter Cartridge中，几秒内过滤澄清。滤出液放至HiSpeed tip进行质粒DNA 纯化。 洗脱所得DNA与异丙醇混合并用注射器装入QIAprecipitator中。经浓缩和脱盐后，直接从QIAprecipitator上用TE缓冲液或水洗脱DNA。

应用

HiSpeed Plasmid Kits纯化得到超纯转染级纯DNA，适合于多种应用，包括：克隆、测序、转染和质粒介导的基因沉默等。

特点	参数
Applications	Transfection, cloning, sequencing, gene silencing
Culture volume/starting material	150 µl – 250 ml culture volume
Plasmid type	High-copy, cosmid DNA
Processing	Manual (filtration)
Samples per run; throughput	1 sample per run
Technology	Anion-exchange technology
Time per run or prep per run
Yield