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- 百奥莱博
- BTN120506-PHD
- 北京
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
185
- 英文名：
T4 Polynucleotide Kinase
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
250U
特别提示：包括T4聚核苷酸激酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：T4聚核苷酸激酶
英文名称：T4 Polynucleotide Kinase
产品货号：BTN120506
产品规格：250U
T4聚核苷酸激酶能够催化ATP的γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链(双链或单链DNA或RNA)的5′-羟基末端以及3′-单磷酸核苷上。本产品还具有3′磷酸酶活性，将3′-磷酸基团从寡核苷酸的3′磷酸末端、脱氧3′-单磷酸核苷和脱氧3′-二磷酸核苷上水解掉。其反应示意图如下：
产品用途：
1．DNA或RNA的末端标记，用作寡核苷酸探针和进行DNA测序。
2．寡核苷酸5′末端的磷酸化，以便进行连接反应。
3．除去3′磷酸基团。
产品组成：
| 成分 | 规格 |
| T4聚核苷酸激酶，10U/μL | 25μl |
| 10×反应缓冲液 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
活性定义：1 单位指在37℃条件下，30分钟内催化 1nmol 酸不溶性 [32P] 掺入所需要的酶量。
1×反应缓冲液：[70mM Tris-HCl(pH7.6@25℃)，10mM MgCl2，5mM DTT]，37℃温育。
热失活：65℃加热20分钟。
来源：重组E.coli菌株，克隆有T4多聚核苷酸激酶或修饰的T4多聚核苷酸激酶基因。
自备试剂：0.5M EDTA(pH8.0)、[γ-32P或γ-33P]-ATP或0.1mM ATP、DNA纯化试剂盒。
使用方法：
一、DNA 5′末端标记：
1．参考如下表格设置反应体系：
| 待磷酸化DNA | 1～50 pmol(5′末端) |
| 10×反应缓冲液 | 5μL |
| 自备的[γ-32P或γ-33P]-ATP(3000Ci/mmol) | 50pmol |
| 补充无核酸酶的去离子水 | 至48μL |
| T4聚核苷酸激酶,10U/μL | 2μL |
2．按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
3．37℃孵育30分钟。
4．加入自备的1μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
5．后续可以使用酚氯fǎng抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA 纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒可以向我公司订购。
二、DNA 5′末端磷酸化：
1．参考如下表格设置反应体系：
| 待磷酸化DNA | 1～50 pmol(5′末端) |
| 10×反应缓冲液 | 5μL |
| 自备的0.1mM ATP | 3μL |
| 补充无核酸酶的去离子水 | 至48μL |
| T4聚核苷酸激酶，10U/μL | 2μL |
2．按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
3．37℃孵育30分钟。
4．加入自备的1μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
5．后续可以使用酚氯fǎng抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA 纯化试剂盒进行纯化。
我公司销售的T4聚核苷酸激酶北京厂家，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验我做NF-kB的EMSA实验方法和结果，条带不好，请大家指点！
。 （7）吸取上清，为核蛋白提取物。 （8）马上进行EMSA实验。 探针制备： 用γ-32P-ATP及T4多核苷酸激酶对合成的转录因子结合和突变型寡核苷酸的两条互补链分别进行末端标记。20 µl反应总体积中，加寡核苷酸10 pmol，10×T4多聚核苷酸激酶缓冲液2µl，γ-32P-ATP 3 pmol，T4多核苷酸激酶10 u，37 ℃反应45 min，再置于68 ℃ 10 min灭活。在离心管中加入退火反应液60 µl，互补配对的两条链的标记产物各20 µl，于95 ℃变性5min，缓慢降温
【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
液： 1X T4 DNA Ligase Buffer: [50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 25 µg/ml BSA, (pH 7.5 @ 25°C)]。推荐DNA浓度(0.1 - 1 µM 的5′末端)。 使用注意：ATP是反应必须的辅因子。这一点与要求NAD作辅因子的大肠杆菌DNA连接酶不同。 如在反应体系中补加1 mM的ATP，连接反应还可以在NEB提供的四种限制性内切酶缓冲液(NEBuffers)或在T4 DNA多聚核苷酸激酶
于基因库中克隆序列的鉴定，基因组DNA样品的点突变检测和原位杂交。 ⑥5’端寡核苷酸的T4多聚核苷酸激酶法。T4多聚核苷酸激酶可将γ-32P-ATP的γ-磷转移到游离的5’-OH端上。合成寡脱氧核糖核苷酸时，它们通常未被磷酸化，因而在5’端应含有一个羟基。由于探针分子只掺入了一个同位素分子，故探针活性与其长度有关。短寡核苷酸可被高比活性标记，而较长的探针活性则随其长度增加而降低。这种激酶标记方法最常用于DNA序列测定。 ⑦聚合酶链反应标记法。聚合
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