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文献和实验。 图 1. 富集质膜组分后检测跨膜蛋白更易检出:目的蛋白 SGL1 是跨膜蛋白,使用总膜蛋白检测困难,使用柱式法质膜及细胞组分分离试剂盒富集质膜后再检测质膜组分,可以显著提高 SGL1 的检出效率。 (图片来源:Kashiwagi Y,2015,PLoS ONE 10(6):e0130605. doi:10.1371/journal.pone.0130605.) (3)有条件诱导目的蛋白表达 如果通过增溶目的蛋白或分离亚细胞结构富集目的蛋白,仍无法得到 WB 条带,可通过查阅相关
错,lncATLAS 也没有错。因为细胞各组分的测序数据中都有 MALAT1 的序列,MALAT1 更多的表达在核里而已。小伙伴们,总结一下 lncATLAS 的特征:发明了 RCI 值,定量亚细胞定位的可信度,同时参考表达丰度,以可发表的数据图的形式表现 lncRNA 亚细胞定位信息。因为不同的细胞,lncRNA 的亚细胞定位不一样,想快速确定 lncRNA 的定位,FISH 定位需要有严格的技术要求,那么胞浆胞核分离确定定位情况将是不错的选择,下方的胞浆/胞核分离试剂盒值得一试,扫描二维码或点击阅读原文可查
,首先使用 Invent 柱式法胞质胞核分离试剂盒将样品分为胞浆蛋白和胞核蛋白,每组按照胞浆组分,胞核组分顺序分别上样,使用 GAPDH 作为胞浆内参,LaminA/C 作为胞核内参,验证胞质胞核分离成功无交叉污染。 检测目标蛋白 NF-ĸB p65,验证了过表达 circ-Sirt1 的血管平滑肌细胞(VSMCs)中,TNF-ɑ 诱导的 NF-ĸB p65 的核易位被显著抑制,并伴有促炎细胞因子和黏附分子表达减少(图 E)。相反,敲低内源性 circ-Sirt1 增强了 TNF-ɑ 诱导的 NF-ĸB
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