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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
26
- 英文名:
Mannheimia varigenaPCR
- 保质期:
1年
- 供应商:
江西江蓝纯生物试剂有限公司
- 保存条件:
低温避光保存
- 规格:
50T /100T
| 规格: | 50T | 产品价格: | ¥1500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 100T | 产品价格: | ¥3600.0 |
产品名称:异源曼氏杆菌PCR检测试剂盒
英文名称:Mannheimia varigenaPCR
特点优势:
1.特异性:所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析,经过GenBank及自建庞大数据库的比对,确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段,可实现对种属及血清型的特异检测,特异性均达到。
2.重现性:该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证,重现性为。
3.灵敏性:该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测,当样品中的浓度达到103cfu/ml时,可实现对其的直接检测,无需繁琐的增菌过程。
4.实用性:检测范围广,涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌,可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测,整个检测过程为3-4个小时。
5.优势1:序列资源丰富,除GenBank公布的序列外,公司还进行了大量菌株的序列破译,从理论上保证所选引物具有良的保守性和特异性。
6.优势2:该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证,凭借公司拥有的丰富的菌种资源,每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证,确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集。
2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(zui多冻融3次)。
3、运输:异源曼氏杆菌PCR检测试剂盒采用泡沫箱加冰密封进行运输。
使用方法:
注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理(样本处理区)
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书。阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)
取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。
2.加样(样本处理区)
3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。
异源曼氏杆菌PCR检测试剂盒组成及试剂配制:
1、 酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
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文献和实验左右;针对干细胞、神经细胞等可以将浓缩倍数提升到 10 倍左右,因为这些细胞外泌体分泌量相对肿瘤细胞来说要少很多。 第四步外泌体提取: 方法 优点 缺点 超速离心法 提取量相对较大 一法适用多类样品 成本较低 操作复杂度高 耗时长 因离心管材质量高低,管壁吸附损失程度不同 同时检测的样品数量有限 需要超速离心机 外泌体提取试剂盒 操作简单 耗时较短 不需超速离心机 纯度较超速离心法高 单次处理体积偏小 文章来源:宇玫博生物
细胞来说要少很多。 最后,针对细胞上清液的外泌体的提取。这个是老生常谈的问题,这里就不再多讲了。如果实验室有超速离心机的话,那就使用超速离心的方法,按照前文建议的预处理操作后,超离后的沉淀也会增加的,同时外泌体的质量也会提升。如果实验室没有超离的情况下,也可以通过试剂盒的方法来提取,除了进口品牌外,也可以使用一些国产试剂盒,质量也不亚于进口品牌的。 总结一下,为了获得高质量的外泌体:需要在细胞培养时减少正常血清的使用,推荐去外泌体血清或者外泌体专用无血清培养基;收获
,不能得到足够的菌量来抽提质粒,摇菌时间一般 12-14 小时为宜。 ③质粒属于低拷贝类型,导致收集的细菌量过少。 ④提取时菌量过多:容易导致裂解不充分,且容易超过硅胶膜柱的承载上限,最终使得质粒提取效率降低,建议参考提取试剂盒建议的菌液量来提取。 ⑤质粒提取实验操作不当:比如在加入缓冲液重悬菌体时,菌体没有充分分散悬浮,导致后续裂解不充分。为指示菌体是否充分裂解,可以考虑在重悬缓冲液中加入指示剂(QIAGEN 质粒提取试剂盒中均有配备 LyseBlue 指示剂),均匀蓝色指示悬浮充分。 ⑥试剂使用










