酵母线粒体膜蛋白提取试剂盒北京厂家

特别提示：包括酵母线粒体膜蛋白提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：酵母线粒体膜蛋白提取试剂盒
英文名称：Yeast mitochondrial membrane protein extraction kit
产品货号：HR8067
产品规格：50T|100T

线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质-脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。
酵母线粒体膜蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种酵母样品中提取线粒体膜蛋白。提取过程简单方便。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解线粒体膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒不能用于冷冻样品的线粒体膜蛋白提取。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理(相关产品HR0389)。

储存条件：提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3．禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5．最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS缓冲液● 移液器、吸头 ●离心机及离心管● 涡旋振荡器 ● 振荡器/脱色摇床 ●冰箱，冰盒

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

1．酵母培养物，在4℃，5000g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
2．用PBS 洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3．每100μl体积酵母沉淀物中加入400μl酵母线粒体提取液A，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。
【注】：
● 酵母数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
4．5000g条件下离心5-10分钟，收集酵母沉淀。
5．用PBS 洗涤酵母一次，离心收集菌体。
6．酵母沉淀物中加入500μl酵母线粒体提取液B，混匀后，在37℃或室温条件下轻微振荡45-120分钟。
【注】：
● 一般1小时左右即可。
7.在5000g条件下离心5-10分钟，收集沉淀，弃上清。
8．沉淀用PBS 洗涤两次。离心收集沉淀。
9．沉淀中加入400μl 酵母线粒体提取液C，高速涡旋15秒混匀，然后在振荡器上轻轻振荡20-40分钟。
10．再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，500g条件下离心3分钟。
11．将上清吸入另一干净离心管，收集上清，弃沉淀。
12.在4℃，11000g条件下离心20分钟。
13．弃上清，在沉淀中加入200-400μl冷的线粒体膜蛋白提取液D，混匀。
14.在4℃条件下轻轻振荡20-30分钟。
【注】：
● 此步振荡完离心后，沉淀应明显大量减少，否则请延长冰浴裂解时间至30分钟或更长，直至线粒体充分裂解。
15.在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
16．将上清吸入另一预冷的干净离心管，37℃水浴5-10分钟，37℃下1000g-2000g力离心5分钟，此时溶液分为两层(对着光线看)，下层是膜蛋白约为20-50μl。
【注】：
● 没用37℃离心条件可以不离心，延长水浴时间至液体澄清透明，分层即可。
17.小心移除上层，留下下层即为线粒体膜蛋白。
18．用50-100μl膜蛋白溶解液E溶解下层，即得到酵母线粒体膜蛋白样品。
19．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
●蛋白浓度低？
酵母线粒体膜蛋白丰度极低，在条件允许的情况下，需要尽可能加大酵母细胞的上样量。
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂BCD的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
●用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

我公司销售的酵母线粒体膜蛋白提取试剂盒北京厂家，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。