DH5α电击感受态细胞北京厂家

特别提示：包括DH5α电击感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：DH5α电击感受态细胞
英文名称：DH5α Electroporation-Competent Cell
产品货号：MQ0025
产品规格：5×50μl/20×50μl

DH5α电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。
DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。
缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选。
DH5α电击感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达1×1010 cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F)U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+)supE44λ-thi-1gyrA96 relA1 phoA
操作说明：
一、0.1cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
二、取-80℃保存的DH5α电击感受态细胞插入冰中5分钟，待其融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。
A.测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒pUC19；
B.对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液(10mM Tris HCl，pH7.5;1mM EDTA)重悬，DNA浓度不超过100ng/μl，体积不超过5μl/50μl感受态。
三、用200μl枪头将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
四、启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV(此为BioRad电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作)，将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
五、2分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入700 μl不含抗生素的无菌S.O.C.培养基(室温)，用1ml枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50ml离心管(BD Falcon50ml锥形离心管等)，向离心管中补加S.O.C.培养基至5ml。37℃，225 rpm复苏60分钟。
六、5000rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上(因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17小时。
注意事项：
(一)加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。
(二)电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
(三)当DNA不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
(四)电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
(五)若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
(六)对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液(10 mM Tris HCl，pH7.5;1 mM EDTA)重悬产物，保证 DNA浓度不超过100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
(七)混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头(普通 200μl枪头应剪去枪头尖 0.6cm)避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
(八)电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。

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