DH5α感受态细胞

本公司生产的DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺制备得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达10⁸，-70℃保存3-5个月转化效率不发生改变。

基因型: supE44△lacU169（φ80 lacZ△M15）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1

特   点: 一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重组缺陷的抑制型菌株。其φ80 lacZ△M15基因的产物可与pUC载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现β互补，可用于蓝白斑筛选。

操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）

1、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以100ul感受态细胞为例。

2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA，注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置30分钟。

3、将离心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟，注意不要摇动离心管。

4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基，37℃ 180rpm振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培养12-16小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的DNA总量较多，可取100ul左右的转化产物涂板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300ul的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事项：

      1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。

      2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

      3、转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

     4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量。

     5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最低。