- ￥260
- 普利莱
- 北京
- C1055-100
- 2025年12月23日
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4℃
- 保质期：
1年
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大量现货
- 供应商：
普利莱
- 规格：
100ml
储存：RIPA裂解液 100ml 4 ℃保存 PMSF粉末 （100mM） -20℃保存
PMSF溶剂 1ml -20℃保存 以上组分12个月有效
制备细胞裂解产物（预先将PMSF溶剂加入PMSF粉末中混匀，按1:99比例加入RIPA裂解液中）
- 800g 4℃离心5分钟收集培养细胞，估计细胞离心后的体积（PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV）；
- 每50-100 ml PCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液（250-500 ml）,冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；
- 12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物；
- 假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。
- 取50-100 mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；
- 加入 0.5-1 ml 预冷 RIPA 裂解缓冲液；
- 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次，直到95％的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；
- 12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；
- 假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；
- 20％的甘油保存于 -70oC 或-20oC。
- 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；
- 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解；
- PMSF溶液易降解，请于-20oC保存，按比例现用现加。
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7.4 * NP-40: 1% * 去氧胆酸钠：0.25% * NaCl: 150 mM * EDTA: 1 mM * PMSF: 1 mM * 抑蛋白酶肽，亮抑酶肽,胃蛋白酶抑制剂: 各1 μg/ml * Na3VO4: 1 mM * NaF: 1 mM 三、实验流程为： （1）转染后24-48 h 可收获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上裂解30min, 细胞裂解液于4°C，最大转速离心30 min后取上清； （2）取少量裂解液以备Western blot分析，剩余裂解液加1μg相应
样本准备 蛋白提取 所需仪器：匀浆器、RIPA 裂解液、PMSF（蛋白酶抑制剂）、磷酸酶抑制剂、剪刀、镊子，消毒酒精棉、PBS、移液器、离心机。 裂解液配制——RIPA 裂解液：PMSF=100：1。 1） 组织处理：首先用酒精棉消毒剪刀和镊子，取适量的组织于匀浆器中，用剪刀剪碎加适量的裂解液冰水中匀浆 1-4 min。匀浆结束后吸取溶液于 EP 管中保存备用。（含血液较多的组织可先用 PBS 清洗后再匀浆） 2） 细胞处理： A、 贴壁细胞处理：去掉培养基用 PBS 清洗后加入适量的裂解液
多篇 SCI 发现用 RIPA 提蛋白存在问题，我们该如何应对？
90, c-Src, 和 tubulin，表明这些蛋白在 RIPA 不可溶组分中大量存在（下图）。Wang 等 [6] 对比 SDS 加热法和 RIPA 裂解液法从斑马鱼肝脏肿瘤中提取蛋白，发现 RIPA 裂解液提取这些样品时对于大分子量蛋白的提取效率十分低（下图）。Li[7] 对比了从小鼠脾脏和肝脏中提取总蛋白 RIPA 可溶和不可溶性组分以及基于离心管柱法商业试剂盒提取的蛋白质图谱，发现 RIPA 不可溶组分蛋白质图谱与可溶性组分图谱相似，但是不完全相同。这些丢失的不可溶组分覆盖了整个蛋白质图谱分子
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