- ￥150 - 650
- 普利莱
- 北京
- C1053+-100/500
- 2025年12月23日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
4℃
- 保质期：
一年
- 英文名：
Enhanced RIPA Lysis Buffer
- 库存：
大量现货
- 供应商：
普利莱
- 规格：
500ml/100ml
| 规格： | 500ml | 产品价格： | ￥650.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100ml | 产品价格： | ￥150.0 |
储存：4 ℃保存 12个月有效
制备细胞裂解产物
- 800g 4℃离心5分钟收集培养细胞，估计细胞离心后的体积（PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV）；
- 每50-100 ml PCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液（250-500 ml）,冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；
- 12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物；
- 假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。
- 取50-100 mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；
- 加入 0.5-1 ml 预冷 RIPA 裂解缓冲液；
- 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次，直到95％的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；
- 12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；
- 假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；
- 20％的甘油保存于 -70oC 或-20oC。
- 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；
- 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解；
- 在该RIPA裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂。
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文献和实验- Qiu L, Yue L, Ni Y, et al. Emodin-induced oxidative inhibition of mitochondrial function assists BiP/IRE1α/CHOP signaling-mediated ER-related apoptosis[J]. Oxidative Medicine and Cellular Longevity, 2021, 2021.
- Deng H F, Yue L X, Wang N N, et al. Mitochondrial iron overload-mediated inhibition of Nrf2-HO-1/GPX4 assisted ALI-induced nephrotoxicity[J]. Frontiers in Pharmacology, 2021, 11: 624529.
- Wang X, Jiang Y, Zhang Y, et al. The roles of the mitophagy inducer Danqi pill in heart failure: a new therapeutic target to preserve energy metabolism[J]. Phytomedicine, 2022, 99: 154009.
- Huang R, Yang L, Zhang Z, et al. RNA m6A demethylase ALKBH5 protects against pancreatic ductal adenocarcinoma via targeting regulators of iron metabolism[J]. Frontiers in cell and developmental biology, 2021: 2929.
- Zhu M, Jia L, Jia J. Inhibition of miR-96-5p May Reduce Aβ 42/Aβ 40 Ratio via Regulating ATP-binding cassette transporter A1[J]. Journal of Alzheimer's Disease, 2021, 83(1): 367-377.
- Gong M, Wang F, Liu W, et al. Pattern recognition receptor-mediated innate immune responses in seminal vesicle epithelial cell and their impacts on cellular function[J]. Biology of Reproduction, 2019, 101(4): 733-747.
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多篇 SCI 发现用 RIPA 提蛋白存在问题，我们该如何应对？
90, c-Src, 和 tubulin，表明这些蛋白在 RIPA 不可溶组分中大量存在（下图）。Wang 等 [6] 对比 SDS 加热法和 RIPA 裂解液法从斑马鱼肝脏肿瘤中提取蛋白，发现 RIPA 裂解液提取这些样品时对于大分子量蛋白的提取效率十分低（下图）。Li[7] 对比了从小鼠脾脏和肝脏中提取总蛋白 RIPA 可溶和不可溶性组分以及基于离心管柱法商业试剂盒提取的蛋白质图谱，发现 RIPA 不可溶组分蛋白质图谱与可溶性组分图谱相似，但是不完全相同。这些丢失的不可溶组分覆盖了整个蛋白质图谱分子
[3] 将细胞裂解物分离成 RIPA 可溶性和 RIPA 不可溶性组分，发现在两个组分中都可以检测到 TDP-43 的磷酸化片段。同样的，用 RIPA 缓冲液裂解小鼠 MEC 细胞时，磷酸化的 EGFR（pY-1068 EGFR）只在 RIPA 可溶性组分中检测出。然而，磷酸化的 c-Src（pY-416 c-Src）则在 RIPA 可溶性和 RIPA 不可溶组分中都能检测出， 甚至 WT 样品在 RIPA 不可溶组分中的信号比 RIPA 可溶性组分中更强（下图），结果表明如果仅使用 RIPA 可溶性组分
冻存于-20°C.样品采用蛋白酶K处理可使相邻肽段剪切成羧基团的芳香族氨基酸和脂肪族氨基酸。蛋白质和DNA之间的交联通过DNA的纯化被打断。3检测DNA浓度，取5ul纯化的DNA到995ulTE中得到一个原溶液的200倍稀释测其OD260。那么DNA的浓度就为OD260x10,000.μg/ml。这样就可计算出染色质制品的DNA浓度。4 免疫共沉淀1 从2.2得来的染色质制品，推荐每个IP样品都采用25ug的DNA的量。每个样品按1：10的量加入RIPA溶液。需要一个样本作为空珠子的对照。2在除空
