基因过表达稳转株

吉凯基因：过表达工具经验分享

啥意思？外黄内白）。基因的操作，其实就两个方向，overexpress，和knockdown（程度大点就是knockout，不是季博卖弄英文，这里用英文表述得更清晰些）。Knockdown今天不讨论。就讨论过表达。过表达，就是把基因上调表达，高于原本天然的表达量。方法，1、外源构建目的基因的CDS区，使用外源启动子表达外源构建的目的基因。这个是最常用的方法，今天就讨论这个。2、上调目的基因的激活型转录因子，从而使得基因上调表达。怎么上调目的基因的激活型转录因子呢。一个是参考1中的外源构建。一个是用药

你已经是个成熟的细胞了，该学会自己做实验了

就比较困难，某种程度上干扰更为重要，想说明一个基因对于一个事件是必须的，只有把它拿掉，事件终止（或程度减弱），才比较有说服力。但是，如果你的基因在细胞中基础表达本身就不高的话，还是有必要来选择过表达实验来对其表型进行验证的，否则实验会受到质疑。关于下调基因表达，一般来说干扰稳转株能满足实验所需。但是，干扰稳转株不能控制 shRNA 插入染色体的位置，染色体上的 shRNA 有时会丢失，另外 shRNA 也有脱靶效应，可能干扰了其他未知基因。还有就是，shRNA 是与目的基因的 mRNA 作用而使

大神教你瞬时转染快，准，狠！

一般情况下，瞬时转染是将 DNA 导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中，重组 DNA 导入感染性强的细胞系以获得目的基因暂时但高水平的表达。转染的 DNA 不必整合到宿主染色体，可在比稳定转染较短时间内（最多一周左右）收获转染的细胞，并对溶解产物中目的基因的表达进行检测。如果过表达基因用质粒，如果敲降用的是 siRNA（在 microRNA 实验中，过表达用的是 mimics，敲降用的是 inhibitor）。通过瞬时转染，将目的基因敲降或者过表达（gain and loss 实验），观察下游