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- 2025年07月16日
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- 提供商：
派致生物
- 服务名称：
CRISPR/cas9文库基因筛选综合服务
- 规格：
定制
CRISPR文库基因筛选
技术背景
在后基因组时代，基因芯片和二代测序技术可以高通量筛选不同样本间的差异基因，但无法有效判断差异基因的功能或基因与表型的关系。利用功能缺失（Loss-of-Function）或功能获得（Gain-of-Function）高通量筛选策略，可帮助研究者快速高效地筛选出在特定表型中发挥关键作用的基因，为深入了解疾病发生发展的机制和新药的开发提供重要思路。
目前可用于高通量功能筛选的技术有RNAi(RNA干扰)、CRISPRko(CRISPR knock-out) 、CRISPRa( CRISPR activation)和CRISPRi(CRISPR interference)，每个技术都各有优缺点，可根据不同需要进行选择。其中CRISPRko同时覆盖编码基因和非编码基因，脱靶率低，技术成熟稳定，应用广泛。
CRISPR文库筛选原理及步骤
针对待筛选基因中的每个基因设计sgRNA，可获得覆盖全基因组的寡核酸（sgRNA）文库，将所有sgRNA构建到慢病毒载体上并包装慢病毒，以低MOI值感染表达系统其它元件的细胞，可获得理论上每个细胞单基因功能缺失细胞库。通过特定表型或报告基因的筛选获得目的细胞，经高通量测序及分析即可获得与筛选条件高度相关的候选基因。
CRISPR文库筛选步骤（Montalbano,A.et al,Mmolecular Cell 2017）
文库选择
| 文库名称 | 物种 | 覆盖范围 | 载体类型 |
| GeCKO v2 human library |
human | 19,050个编码基因（每基因6条sgRNA)+1864个miRNA(每miRNA 4条sgRNA)+1000条control sgRNA，共计122411条sgRNA | 慢病毒双载 |
| CRISPR/Cas9 sgRNA定制文库 | 可选择 | 根据需要定制lncRNA、细胞凋亡、细胞增殖、信号通路、核受体相关等文库 | 慢病毒单载或双载可选择 |
可选择筛选表型
1、细胞耐药筛选
2、细胞增殖筛选
3、细胞凋亡筛选
4、细胞信号通路筛选
文库应用
1、筛选表型相关关键基因或信号通路，研究表型调控机制。
2、筛选肿瘤治疗潜在靶点，研发新药。
3、筛选耐药或增敏基因，开发新的联合用药方案。
服务流程
筛选表型及文库类型确认→sgRNA文库合成并构建→sgRNA文库慢病毒包装→病毒感染目的细胞→筛选感染阳性细胞→表型筛选→高通量测序分析并确定基因列表
派致生物专注于基因编辑技术的开发与应用，并致力于为临床和基础研究人员提供专业、全面的CRISPR文库基因筛选定制服务。
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文献和实验157(6) (2014) 1262-1278. [5] K.H. Siu, W. Chen, Riboregulated toehold-gated gRNA for programmable CRISPR-Cas9 function, Nat Chem Biol 15(3) (2019) 217-220. [6] X.W. Wang, L.F. Hu, J. Hao, L.Q. Liao, Y.T. Chiu, M. Shi, Y. Wang, A microRNA-inducible
越发火热的 CRISPR Screen 技术又发大文章，耶鲁大学 Cell 揭示在 CD8 T 细胞中筛选出免疫治疗新靶点！
(NF-kB) p65 和 PDCD11 相互作用，共同调节 CD8 T 细胞的 NF-kB 通路活性该研究结果表明，在体内进行高通量的基因筛选可以用于探索免疫治疗靶点，并确定 DHX37 可调节 CD8 受体阳性 T 淋巴细胞功能，作为三阴性乳腺癌免疫治疗靶点。作为一种强大的基因编辑工具，近年来随着 CRISPR/Cas9 技术的发展，其被广泛地应用于基因敲除、敲入，转录激活、抑制，DNA 甲基化，组蛋白修饰以及全基因组筛选等领域[2]。Cas9 蛋白功能的多样性[2]图片来源：Nat Rev
Cell 表明利用一种基于 CRISPR/Cas9 的技术有望治疗脆性 X 染色体综合征doi:10.1016/j.cell.2018.01.012; doi:10.1016/j.cell.2016.08.056来自美国怀特黑德生物医学研究所的研究人员首次使用他们开发的一种移除甲基化的改进型 CRISPR / Cas9 系统恢复了受这种疾病影响的神经元中的 FMR1 基因活性，这提示着这种方法可能经证实是一种靶向由异常甲基化引起的疾病的有用范例。这项研究是首个直接的证据表明对 FMR1 基因的特定片段
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