细胞缺氧检测试剂盒优惠促销

特别提示：包括细胞缺氧检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：细胞缺氧检测试剂盒
产品货号：HR8264
产品规格：200T

缺氧是恶性肿瘤发生、发展过程中普遍存在的现象,其产生主要与肿瘤无限制生长、氧耗增加、血供不足及肿瘤组织血管发育不良等有关,也是临床多种疾病共有的病理过程。缺氧环境下的肿瘤细胞易发生转移,并且能增加对放疗、化疗的抗拒性,从而降低了治疗效果。因此,研究缺氧的发生和发展规律,对临床治疗、增强机体代偿适应能力都有重要意义。
细胞缺氧通常可导致胞内的硝基还原酶(Nitroreductase,NTR)的增加。在缺氧条件下,以还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Reduced nic-otinamide adenine dinucleotide,NADH)作为电子供体,细胞内的硝基还原酶可催化多种外源硝基芳香族化合物发生单电子转移,生成硝基阴离子自由基,随后进一步被还原成羟胺或氨基。
细胞缺氧检测试剂盒是一种利用O13荧光探针进行细胞缺氧状态检测的试剂盒。O13荧光探针可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的还原酶氧化，形成红色荧光产物，产生红色荧光。红色荧光随着缺氧程度的增加二增强。因此，根据活细胞中红色荧光的产生，可以判断细胞缺氧的变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接检测观察，是一种快速简便的组织或培养活细胞中缺氧变化的检测方法。
在激发波长535nm，发射波长610 nm 附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光，从而测定细胞内缺氧状况。
本试剂盒可以用于各种真核培养细胞、培养或灌流组织及组织冰冻切片的检测。

储存条件：-20℃避光保存。
有效期：六个月。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

产品特点：
● 使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；
● 背景低，灵敏度高；
●线性范围宽，使用方便。
检测方法：
荧光显微镜
流式细胞仪
激光共聚焦
样本类型：
● 悬浮细胞
● 贴壁细胞
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器
● 流式细胞仪或荧光显微镜或激光共聚焦或荧光分光光度计荧光酶标仪激发波长535nm，发射波长610 nm。
●离心机● 移液器●冰箱●冰盒
耗材
●离心管● 吸头
试剂
● PBS(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液phosphate buffer saline/Dμlbecco’s PBS：
约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)或者HBSS(Hank"s Balanced Salt Solution； With：Calcium Magnesium Glucose；Without：Phenol Red。Components：CaCl2(anhydrous)140mg/L(1.261mM)、MgCl2-6H2O 100mg/L(0.493mM)、MgSO4-7H2O 100mg/L(0.407mM)、KCl 400mg/L (5.333mM)、KH2PO4 60mg/L(0.441mM)、NaHCO3 350mg/L(4.167mM)、NaCl 8000mg/L(137.931mM)、Na2HPO4(anhydrous)48mg/L(0.338mM)、Glucose 1000mg/L(5.556mM))

使用方法：

使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
●荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
●探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
●对于药物作用时间较短(2小时以内)的细胞，先标记探针，后用药物刺激细胞。对于药物作用时间较长(6小时以上)的细胞，先用相应的药物刺激细胞，后标记探针。
● O13在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。
●对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察缺氧的变化。
O13探针标记：
1．O13溶液可在新鲜培养液、缓冲盐溶液或组织灌流液中稀释到所需
浓度，100-1000倍稀释，以此染色液更换细胞培养液或灌流液；也可直接向细胞孵育液体或灌流液中加入O13探针溶液至所需浓度。
2．依据细胞缺氧程度的不同，O13终浓度可选择在100-1000倍稀释的范围，孵育时间可选择10-90分钟，在37℃或室温进行避光孵育。
3．孵育结束后，用新鲜溶液清洗细胞或组织。
荧光显微镜检测：
1．对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取25-50μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。
2．荧光显微镜下，用蓝光或绿光激发，观察和拍摄细胞红色发射图像，缺氧细胞被染成红色；用紫外光激发时，胞浆中未氧化的探针可发出蓝色荧光。
流式细胞仪分析：
1．对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。
用0.5～1ml冰冷PBS重悬细胞(5～10万)。
2．采用480～535 nm波长激发，测定590 nm～610 nm以上的发射，细胞应可分成两个亚群：阴性细胞仅有很低的荧光强度，缺氧细胞有较强的红色荧光。

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