T4 RNA连接酶北京供应商

特别提示：包括T4 RNA连接酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：T4 RNA连接酶
英文名称：T4 RNA Ligase
产品货号：MT0055
产品规格：1000U|10000U

T4 RNA 连接酶催化3’→5’磷酸二酯键的形成，使核苷酸的5’-磷酸末端和3’-羟基末端连接，伴随着ATP水解为AMP和PPi。T4 RNA连接酶的作用底物包括单链RNA、DNA及二核苷焦磷酸，它可催化ssDNA和RNA的连接，相对于ssDNA，该酶对RNA分子的连接和环化效率更高。



产品应用：
·连接单链RNA和DNA
·RNA 3’末端标记
·RNA和DNA分子内和分子间连接
·合成单链寡脱氧核苷酸
·蛋白质中掺入非天然氨基酸

产品组成：

组分	1000U
T4 RNA Ligase1（10 U/μl)	100μl
10×T4 RNA Ligase Buffer	250μl
10mM ATP	100μl
50% PEG 8000	500μl

储存条件：-20℃可保存3年。

活性定义：1单位指在1×T4 RNA Ligase Buffer中，37℃条件下，30分钟内将1nmol的5’-[32P]rA16转化为磷酸盐不溶物质所需要的酶量。

注意事项：
1．1× T4 RNA Ligase Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5，10mM MgCl2，1mM DTT。该酶反应时需要加入终浓度1mM ATP。
2．最佳反应温度37℃，65℃ 10分钟可使该酶失活。
3．该酶的连接底物无论是ssDNA还是ssRNA均需要5’-磷酸化或预腺苷化。
4．该酶不能连接双链DNA或RNA。
5．加入终浓度5~10% PEG 8000或增加孵育时间可提高连接效率。

使用方法
1．ssDNA 和 RNA的连接反应
（1）配制如下反应体系（20μl）
   RNA或ssDNA底物——————————-0.2～2pmol
   10×Reaction Buffer————————2μl
   PEG8000——————————————5～10%（wt/vol)
   T4 RNA Ligase———————————1μl
   ATP(10mM)—————————————2μl
   灭菌水——————————————-up to 20μl
（2）37℃反应 30～60min，或25度反应1-2h。
（3）65℃15分钟，终止反应。
2．RNA 环化反应
（1）配制如下反应体系（20μl）
   RNA——————————————10μM
   10×Reaction Buffer——————2μl
   PEG8000————————————5～10%（wt/vol)
   T4 RNA Ligase—————————1μl
   ATP——————————————20～50μM
   Rnase inhibitor————————0.5μl
   灭菌水————————————-up to 20μl
（2）37℃反应 30-60min，或25℃反应1-2h。
（3）65℃15分钟，终止反应。

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