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- YT971-QAF
- 北京
- 2025年07月15日
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190
- 英文名：
pET-N-GST-PreScission Plasmid
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
阴凉干燥
- 规格：
1μg|100μg
| 货号 | 规格 | 产品价格 |
|---|---|---|
| YT971-AME | 1μg|100μg | ¥380 - 3800 |
特别提示：包括pET-N-GST-PreScission质粒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：pET-N-GST-PreScission质粒
英文名称：pET-N-GST-PreScission Plasmid
产品货号：YT971
产品规格：1μg|100μg
pET-N-GST-PreScission是一种用于表达N端含有GST-tag的目的蛋白的原核表达质粒。本质粒N端GST标签后含有PreScission酶切位点，可通过PreScission Protease(货号：YT982)切除N端的GST标签。本质粒为卡那霉素抗性。
本质粒含有T7启动子/lac操纵子，可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面有一个GST标签的编码序列。因此在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有GST标签的目的蛋白。
本载体在N端GST标签与多克隆位点之间含有PreScission蛋白酶识别的八肽序列LEVLFQGP，对应的核酸序列为CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC，因此在目的蛋白纯化后可以利用PreScission Protease切除N端的GST标签。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除GST标签的时候目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。
通常可以采用如GoldBalb GST-tag Purification Resin(货号：YT958)和GST标签蛋白纯化试剂盒(货号：YT959)等纯化本质粒表达的目的蛋白，也可以使用GST抗体(货号：YT784或YT722)检测和少量地分离纯化目的蛋白。
pET-N-GST-PreScission质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| f1 origin | 12-467 |
| Kanamycin resistance ORF | 563-1645 |
| PBR 322 origin | 2084 |
| LacI coding sequence | 3518-4597 |
| T7 promoter | 4988-5004 |
| GST tag coding sequence | 5076-5732 |
| PreScission recognition site sequence | 5733-5756 |
| Multiple cloning site(BamHI-XhoI) | 5757-5804 |
| T7 Terminator | 5872-5918 |
pET-N-GST-PreScission质粒(5943bp)的图谱如下：
pET-N-GST-PreScission质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
pET-F primer(5619-5638):5′- AAACGTATTGAAGCTATCCC-3′
pET-R primer(5857-5876):5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
使用说明：
1．首次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2．100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3．pET-N-GST-PreScission质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
我公司销售的pET-N-GST-PreScission质粒，pET-N-GST-PreScission载体质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验相关，不同的载体是不一样的。一个载体可只看它的启动子到终止子那一段，其它的可以考虑少些。 pET 表达菌株的相关信息 （ DE3 ）指宿主为 λ DE3 溶原菌，其染色体上带有一拷贝由 lacUV5 启动子控制的 T7 RNA 聚合酶基因。这类菌株适用于从克隆到 pET 载体的目标基因生产蛋白。命名为 pLysS 和 pLysE 的宿主菌带有编码 T7 溶菌酶（为 T7 RNA 聚合酶的天然抑制物）的 pET 相容性质粒。带有 pLysS 的细胞
-His Thr EK pBR322 Novagen pET-40b(+) T7-lac Kan (signal sequence) DsbC N-His C-His Thr EK pBR322 Novagen pET-41a-c(+) T7-lac Kan GST N-His C-His Thr EK pBR322 Novagen pET-42a-c(+) T7-lac Kan GST N-His C-His Thr Xa pBR322 Novagen pET
。但是有一点我可以有很大把握的说：对于真核表达，密码子优化只能起锦上添花的作用（确认有表达，以此来提高表达量），而不能雪中送炭（没有表达出来，通过密码子优化极有可能不奏效）。 4、质粒不稳定或者质粒丢失。pET系统通常比较稳定。但是你选用带氨苄青霉素抗性的载体时，也许有可能产生β-lactamase降解了抗生素，使质粒丢失。还有一种情况是表达重组的毒素蛋白，对宿主细胞也有毒性，造成质粒丢失。这种情况多见于真核表达系统。 5、蛋白酶将蛋白降解了。这种情况常由重组蛋白本身的N-或C-端序列引起
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