即用型PCR试剂盒(含染料)现货供应

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")即用型PCR试剂盒(含染料)现货供应，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：即用型PCR试剂盒(含染料)现货供应
产地：国产|进口
规格：1ml×10|5mL×20
品牌：百奥莱博
英文名：Instant PCR MasterMix
编号：BTN90805
本产品内含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂、上样染料等所有PCR所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行PCR反应，具有广泛的用途。

产品特点：
1.扩增效率和灵敏度更高。
2. 方便，用户只需准备模板和引物既可以进行PCR实验。
3.快捷，操作步骤已经最大限度地简化，能减少污染，降低实验误差。
4.产物可直接用于T载体克隆，不需要额外的加A反应。
5.染料单独提供，方便客户组合。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(以30μL的标准PCR反应体系为例)
在一干净的PCR管中，加入下列成分：

 

试剂		加入量
PCR MagicMix		15μl
DNA模板(自备)	哺乳动物基因组DNA	0.5-1μg
	酵母基因组DNA	5-500ng
	细菌基因组DNA	0.5-50ng
	质粒DNA	5-500pg
	PCR回收片段	1-100pg
PCR引物(自备)		10pmol each
补水到		30μL

放入PCR仪中进行PCR,结束后取5-10μL直接上样电泳，按照1.0mL PCR MagicMix加入40μL专用染料的比例将40μL专用染料加入到1mL PCR MagicMix中
注意：
1．如果反应体系不是30μL，各成分需要等按比例增加或减少。
2．如果DNA模板中有PCR不明抑制物(植物、土壤和血液等DNA样品常含此类抑制物)，可以在PCR体系中加入1/10的PCR抑制物清除剂(BTN60804，30μL体系中加3uL)，可能会对PCR有帮助。

PCR反应的影响因素
变性温度与时间：模板变性温度是决定PCR反应中双链DNA解链的温度，达不到变性温度就不会产生单链DNA模板，PCR也就不会启动。变性温度低则变性不完全，DNA双链会很快复性，因而减少产量。变性温度太高，又会影响酶的活性。一般情况下可设为94℃ 20~30秒，高温时间应尽量缩短，以保持耐热DNA聚合酶的活力，最高变性温度不宜超过95℃。
退火温度与时间：退火温度决定PCR特异性与产量。温度高特异性强，但过高则引物不能与模板牢固结合，DNA扩增效率下降；温度低产量高，但过低可造成引物与模板错配，非特异性产物增加。合适的退火温度一般在45~68℃之间。设置特定反应的最适退火温度，可根据引物的(G+C)%含量进行推测，一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为30~60秒，足以使引物与模板之间完全结合，长时间退火没有必要。
延伸温度与时间：PCR反应的延伸温度一般选择在70~75℃之间，延伸时间根据所用聚合酶扩增速度和扩增片段大小设定，如同样扩增2 Kb片段，若使用Taq酶只需1分钟，使用Pfu酶则应设定2分钟以上。延伸时间过长会导致非特异性扩增带的出现，时间太短则可能得不到扩增产物或得到一些短的非特异性片段。
循环次数：可根据模板DNA的量、扩增片段的大小和扩增产物的下步应用等因素，设定20-40个循环。循环次数太少，扩增量不足，如果循环次数太多，错配几率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。
酶量：50μl反应体系可用0.5-5 U酶，酶量的选择与模板DNA的量，扩增片段大小等有关，酶量过多易发生非特异性反应，而且可能增加突变的机率，尤其在进行高保真扩增时，应尽量减少酶量，但酶量过少时反应性能下降。
模板：模板可以是单链DNA，也可以是双链DNA，质粒DNA的扩增效率略低于线状DNA。模板加量一般不需太多，不超过1μg为宜，因为加量过多可能导致非特异性扩增增加，但是要考虑模板中靶序列的含量。例如，使用基因组为模板扩增单拷贝或低拷贝靶序列，就需要适当加大模板用量。
引物：引物与模板配对的长度应至少为17个核苷酸，最高不宜超过30个核苷酸，最佳长度为20~24个核苷酸，如需插入酶切位点，应在酶切位点5´端多加几个碱基，有利于酶切。引物的(G+C)%含量组成应均匀，尽量避免含有相同的碱基多聚体。两个引物中(G+C)%含量应尽量相似。引物内部应避免形成明显的次级结构，如发夹结构。两个引物之间不应发生互补，特别是在引物3´端。如果可能，引物3´端最好富有GC，这样退火后有利于引物3´端的延伸。人工合成的引物最好经过色谱层析纯化或PAGE纯化，以除去未能合成至全长的短链等杂质。引物的终浓度一般为0.1-2μm左右，浓度太高会导致非特异性扩增，太低则扩增产物太少。

关于即用型PCR试剂盒(含染料)现货供应的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·EDTA溶液(0.5M,pH8.0)(DNA级)
编号：BTN100842
规格：250mL

·植物RNA提取试剂盒
编号：BTN3080
英文名称：Plant RNA extraction kit
规格：50次
本试剂盒是我们公司自主开发的独特产品，其原理完全不同于异硫*酸胍/酚/*仿提取方法，克服了后者不能区分RNA(本质上是多糖)和其他植物多糖的缺点，能高效将RNA和其他植物多糖分开，同时还能有效去除多酚和其他植物次级代谢成份。其有效性在近五十多种各类植物(见附录，包括十分棘手的松柏类植物)中得到验证。

试剂盒特点：
1.适用于绝大多数植物，从五十多种植物材料中都成功提取到了总RNA，其中包括松针、柏树、香蕉等用胍/酚/*仿方法未能提取到RNA的植物(注：部分植物组织，如果实，RNase含量极高，需要另外加RVC抑制其活性)。
2. 操作简单快速，最短可以只需要约十五分钟，可以全在室温下进行。
3. 得到的RNA平均 OD260/280在1.9左右，可直接用于RT-PCR和Northern等研究。

试剂盒组成：

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	25ml
溶液D	25ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1、准备
a)估算试剂和组织细胞的用量并准备足够的*仿、75%乙醇和RNA溶解液(如RNApreserve、无RNase的水或有灭活残留RNase活性的液相RNase清除剂)。每次微量提取一般需要100-200mg植物叶片、或50-100mg植物种子、或200-500mg植物果实。
b)溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解。
2、匀浆
a)先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNAhold中的植物组织需用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块)，放入10-15mL塑料离心管中，加入1mL溶液A，然后用匀浆器匀浆5-20秒，将不超过1mL的匀浆液转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。有的植物组织(果实)含有大量水份，匀浆液会多于1mL，转移时也只取1mL。
b)如果用砚磨法破碎植物组织，需将植物组织浸泡在1mL溶液A中再砚磨，尽量避免植物组织跟空气直接接触，然后将砚磨物转移到新的1.5mL离心管中。
3、第一次分相
a)在装有裂解物的离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备*仿，用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
b)室温12000～15000g离心5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
c)将上清液(约0.8mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μl上清液不取。
4、第二次分相
a)在上清液中加入0.5mL的溶液C和0.2mL的自备*仿，用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
b)室温12000～15000g离心3分钟，两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。
c)将上清液(约1mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中,避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物。
5、沉淀
a)在上清液中加入0.5倍体积的溶液D，用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈白色浑浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。如果提取 50mg以下的微量植物组织样品，最好在此步加入我们公司的微量助沉剂RNApp。
b)室温12000～15000g离心3～5分钟，RNA将在管底形成白色沉淀(约黄豆大小)。如果组织样品量少或需要提高RNA回收率，也可以延长离心时间到20-30分钟。
c)小心移弃上清液，避免触及管底RNA沉淀。
注意：如果加入溶液D离心后沉淀漂浮在上面，说明植物糖份多，溶液比重大，可以少加植物样品，也可以适当加无RNase的水稀释直到沉淀能够沉下去为止。如果离心后管底有类似*仿的相出现，说明上一步离心时间不够或取上清时取到了下层的有机相，可以适当延长离心时间或取上清时留下约100μl不取或在第四步时加0.3mL的自备*仿。
6、第一次清洗
a)在离心管中加入1mL 75%的乙醇，振荡器上振荡混均30秒。
b)室温12000～15000g离心1分钟，RNA将在管底形成细小沉淀(约芝麻大小)。
c)小心吸弃上清液,注意不要吸弃RNA沉淀。
7、第二次清洗
a)重复第六步一次。
b)短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留液,注意不要吸弃沉淀。此步将有效去除残留的乙醇，否则后续反应会受到影响。
8、溶解
a)加入适量(一般为20-100μl)RNA溶解液使RNA沉淀溶解，存放于-80℃或立即使用。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥,否则RNA将变得十分难溶。
9、检测
a)RNA完整性的电泳检测
如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是简单检测，可以使用TAE或我们公司的SuperBuffer-2 DNA/RNA两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9：558，1990)。普通DNA上样液不含变性剂，也没经过去RNase处理，所以最好不要使用。
尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳，因为TBE所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分，硼*(代"酸")通过与RNA核糖中的羟基发生络合反应，形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物，使同样长度的RNA具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关，而RNA样品中污染的其他多糖(如植物中提取的RNA)也会参与此反应，使硼*(代"酸")对RNA电泳的影响更复杂，所以TBE对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，最好是避免使用。
由于动物细胞中70-80%的RNA为rRNA，后者又由28S(约4800nt)，18S(约1900nt)和5.8S(约120nt)三种组成，所以变性胶电泳后应该在UV下看见三条清晰的rRNA带。由于核酸长度与结合EB的数量成正比(当然还与RNA的二级结构有关，双链部分结合能力比单链部分强)，所以28S rRNA条带的荧光强度一般比18S rRNA条带的荧光强度强1.5-2.3倍。如果这两条rRNA带不清晰或比例小于此范围则表示RNA有降解(因为大的RNA被酶降解的可能更大)。
跟动物一样，植物果实和种子的RNA一般有三条电泳带，但植物叶片的RNA有四条或更多rRNA带，多余的RNA来源于叶片中大量存在的叶绿体。
b)RNA产量产率测定
将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%，因为核酸光吸收跟溶液pH相关，而DEPC水中的DEPC高压分解后产生的CO2与水反应生成碳酸，使溶液pH降低进而降低RNA的光吸收。RNA的产率还随组织的营养状态和组织的种类不同而不同，100mg种子的RNA产量一般为100-120μg，100mg叶片为30-60μg，100mg果实为20-40μg。
c)RNA纯度测定
无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用我们公司的DNA Scavenger和PS Scavenger去除。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，我们公司初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。使用我们公司优化的上样/变性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2,最好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。
Q：为何提取的RNA电泳时带型不清楚或根本没有条带？
A：可能原因：
  1、电泳没有使用MOPS缓冲液+甲醛变性胶；
  2、没有使用RNA专用的上样液或使用的RNA专用的上样液放置时间过长；
  3、植物组织样品中RNase很多，可以使用RVC(部分植物果实需要此处理)；
  4、植物组织中含多酚等影响提取的物质(如松柏等植物)，可以在溶液A中加入终浓度为0.1 M的硼*化*。


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ARB11669 人维生素D2(VD2)定量分析 Human vitamin d2,vd2 ELISA KIT
ARB10483 人白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)含量检测 Human soluble interleukin-1 receptor Ⅱ,IL-1srⅡ ELISA KIT
ARB11972 大鼠CXC趋化因子受体3(CXCR3)Elisa定量检测 Rat cxc-chemokine receptor 3,cxcr3 ELISA KIT
葡聚糖凝胶G-100 T3 RNA Polymerase 9050-94-6
D-甘露醇 N-Methyl-D-aspartic acid  69-65-8
2-巯基*并噻唑 Bilirubin oxidase 149-30-4
黑色素(醇溶) 12-Aminolauric acid 8005-02-5
茜素红S染色液(pH4.2)  1% 100ml
CYB161066 人纤维蛋白原(冻干粉)
ARB14192 山羊基质金属蛋白酶-1(MMP-1)Elisa分析 
*化铷 11-Aminoundecanoic acid 7791-20-0
BTN131139 Deaza dGTP溶液,5mM Deaza dGTP Solution
α-羟丁酸脱*酶(α-HBD)检测试剂盒(速率微板法)   100T
E0612 抗凝裂解马血(无菌)
ARB10338 人水通道蛋白4抗体(AQP-4-AB)含量测试 
F030403 胶体金标记小鼠抗人IgG Fab抗体 Monoclonal Mouse Anti-Human IgG Fab*GOLD
*基肽酶染色液(同时偶联法)   3×20ml
BTN100935 超纯水 Ultrapure Water
ARB13518 鱼类促性腺激素释放激素(GnRH)Elisa分析 Fish gnrh ELISA KIT
BL1226 Hanks,含**,不含酚红(HBSS)
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·RecJf核酸外切酶
编号：BTN130629
英文名称：RecJf Exonulease
规格：1000U
RecJf作用于单链DNA，沿5´→3´方向催化去除单磷酸脱氧核苷酸。RecJf与麦芽糖结合蛋白(MBP)融合表达。其催化特性与野生型RecJ相同。与MBP的融合，增强了RecJf的溶解度。当底物为5´端突出了22个核苷酸的DNA时，经RecJf酶切后可得到含有以下三种末端的混合产物：平齐末端、5´突出末端(1-5个核苷酸)和5´凹陷末端(1-8个核苷酸)。RecJf发挥活性时无需5´末端磷酸化。

产品特点：
1．特异性5´→3´单链DNA核酸外切酶；
2．从DNA上切下单磷酸脱氧核苷酸。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期半年。

活性定义：1单位指在50μl反应体系中，37℃条件下，30分钟内产生0.05nmol可溶于TCA的脱氧核糖核苷酸所需要的酶量。

·20×SSPE(pH7.4)
编号：BTN100809
英文名称：RecJf Exonulease
规格：250mL
RecJf作用于单链DNA，沿5´→3´方向催化去除单磷酸脱氧核苷酸。RecJf与麦芽糖结合蛋白(MBP)融合表达。其催化特性与野生型RecJ相同。与MBP的融合，增强了RecJf的溶解度。当底物为5´端突出了22个核苷酸的DNA时，经RecJf酶切后可得到含有以下三种末端的混合产物：平齐末端、5´突出末端(1-5个核苷酸)和5´凹陷末端(1-8个核苷酸)。RecJf发挥活性时无需5´末端磷酸化。

产品特点：
1．特异性5´→3´单链DNA核酸外切酶；
2．从DNA上切下单磷酸脱氧核苷酸。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期半年。

活性定义：1单位指在50μl反应体系中，37℃条件下，30分钟内产生0.05nmol可溶于TCA的脱氧核糖核苷酸所需要的酶量。

·血液RNA柱式提取试剂盒
编号：BTN71202
英文名称：Blood RNA column Extraction Kit
规格：50次
本试剂盒是在血液RNA提取试剂盒(BTN3071)基础上开发的柱式升级产品，专门从动物全血样品中快速提取总RNA。

试剂盒特点：
1. 比BTN3071更加简单快捷，直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品，不需裂解红细胞等任何预处理步骤，整个提取过程只需要十分钟左右，可以全在室温下进行。
2.产量和纯度更高，OD260/280 均在2.0左右，产率一般为2-5μg/mL人血。
3. 每次微量提取的最大样品处理量可以达到1.5mL，高于进口的同类产品。
4.与常用的抗凝剂(包括肝素，EDTA，柠檬酸*，草酸*)兼容，得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究。

试剂盒组成：

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将0.2-1.5mL 新鲜或解冻后的抗凝全血加入到1.5mL塑料离心管中。
2. 12000～15000g室温离心3分钟，弃上清(血浆)。如果此时血液细胞沉淀体积大于0.2mL，则需要减少血液的使用量，具体减少量需根据具体情况决定，因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。
3. 将1mL溶液A加入到血液细胞沉淀中，用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。
4. 将0.3mL的溶液B加入到离心管中，剧烈震荡30秒。
5.和0.2mL *仿加入到离心管中，剧烈震荡30秒。
6. 12000～15000g室温离心3～5分钟，将上清液(为无色或浅红色，约0.5-0.9mL)转移到另一干净离心管中。注意：转移的液体不要超过0.7mL，否则下一步不能加入等体积的溶液C。为防止污染，最好留100μL左右的上清液。下层有机相一般呈深红色，中间层为白色，含有DNA，蛋白质和其他细胞破碎物，避免触及或吸取。
7. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。
8. 分两次将溶液转移到离心吸附柱中，每次转移后12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 加0.7mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 如果有必要，可以再加0.3mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。注意：增加此步可以进一步提高RNA的纯度。
11.室温12000～15000g离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的后续反应。
12. 将离心吸附柱转移到一个RNase-free的收集管中，加入50-100μL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
13. 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
15. RNA产量产率测定：将5-10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。人血RNA产率一般为2-5μg/mL。
16. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在2.0左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：如何去除RNA样品中的DNA污染？
A：可以使用百奥莱博的非酶DNA 清除剂DNA ERASOL-2。
Q：为何有的样品在第6 步离心后有很厚的中间层，上清很少。
A：这是因为蛋白质变性不充分，可以适当减少血液的用量。白细胞多的血液容易产生这种情况。
Q：离心吸附柱的RNA 最大吸附量是多少？
A：是40μg。

北京百莱博科技有限公司是核酸扩增(PCR)产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购即用型PCR试剂盒(含染料)现货供应。