可视化LAMP扩增试剂盒(免DNA提取)

特别提示：包括可视化LAMP扩增试剂盒(免DNA提取)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：可视化LAMP扩增试剂盒(免DNA提取)
英文名称：Colorimetric Direct LAMP Kit
产品货号：BTN180805
产品规格：50次

本试剂盒不需要专门提取DNA，直接用细胞裂解将液进行LAMP，极大缩短了实验。适用于病毒、细菌、真菌、植物、动物的各种形式的样品，包括实体组织、液体样品。可视化肉眼检测实验结果。使用改良的热启动Bst DNA聚合酶，反应特异性更强。高扩增效率更高，扩增效率可达到10⁹～10¹⁰，比PCR灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的DNA分子。

试剂盒组成：

组分	规格
免DNA提取溶液A成分一	100μL
免DNA提取溶液A成分二	200μL
免DNA提取溶液B	1mL
2×LAMP MagicMix	500μL
LAMP阳性对照模板-引物混合物	50μL
超纯水	1mL

保存条件：-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

1．配制免DNA提取溶液A工作液。以配制1mL工作液（足够10个样品）为例：在一干净塑料管中加入10μL溶液A成分一，20μL溶液A成分二和970μL超纯水，充分混合均匀即得1mL溶液A工作液。一次检测一个样品需要100μL溶液A工作液，1mL工作液足够10个样品。没用完的工作液可室温放置，但zuì好在一周内用完，不要长期放置。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液A工作液的体积需要做相应的调整。
2．根据材料不同参考下表取少量样品到一干净的塑料离心管中

样品类型	取用量
动物组织	1～5mg
鼠尾	2mm长
血液样品	≤20μL
植物叶片	1～5mg
植物种子（去皮）	1～5mg
酵母培养物	0.2～0.5mL培养物沉淀
细菌培养物	0.2～0.5mL培养物沉淀

  注意：未列出样品，用户需要自己摸索zuì佳用量。对富含多醌多酚的植物材料（如棉花），组织使用量zuì好不要超过0.5mg。
3．加入100μL溶液A工作液，确保样品被溶液淹埋。
4．95℃保温10分钟。
5．待冷却到常温后加入10μL溶液B并混匀得细胞裂解液，放冰上待用。如果暂时不用，可以放-20℃长期保存。
6．配制自备的5×LAMP引物混合液。
  先加超纯水（不要用TE）将各引物干粉稀释到母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物和超纯水，zuì后得到1mL的5×LAMP引物混合液。如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积大于或小于1mL，则各成分的用量请按比例调整。此混合液可以在-20℃放置2年。

引物名称	母液浓度	加入量	在混合液中浓度
FIP引物	100μM	80μL	8μM
BIP引物	100μM	80μL	8μM
F3引物	100μM	10μL	1μM
B3引物	100μM	10μL	1μM
Loop F	100μM	20μL	2μM
Loop B	100μM	20μL	2μM
超纯水		780μL

7．在新的塑料管中设置LAMP反应（以一个样品为例）：

加入物	样品管	阳性对照管	阴性对照管
2×LAMP Mix	10μL	10μL	10μL
5×LAMP引物混合液(自备)	4μL	-	4μL
细胞裂解液	1～2μL	1～2μL	-
LAMP阳性对照模板-引物混合物	-	4μL	-
超纯水	补水到20μL

8．混匀，此时反应液呈现淡紫色。置于60-65℃保温60-120分钟（具体温
度根据LAMP引物的Tm值决定）。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，建议覆盖50μL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。
9．80℃,10分钟灭活Bst DNA聚合酶。
10．如果有阳性扩增，则反应液将变成淡蓝色，如果没有阳性扩增，反应液将还是淡紫色。标准的反应结果如下图（左边6个为阳性，右边2个为阴性）：

11．电泳确认：取扩增产物5μL直接在2%的琼脂糖凝胶电泳（不需要再加上样液），可见LAMP特征性电泳图谱。电泳需要打开反应管的盖子，释放出的气溶胶非常容易污染实验环境，为下次扩增带来假阳性，所以一定要在隔离的地方进行电泳分析。
12．结果分析：如果阳性对照能够扩增而阴性对照不能扩出，则实验有效。如果阴性对照有扩增出条带，则说明LAMP样品或试剂有扩增产物的污染，需要注意操作的规范性，zuì好重新设计引物扩增新的靶片段。

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