天冬氨酸转氨酶测试盒

产品说明
天冬氨酸转氨酶（AST），也被称为血清谷草转氨酶（GOT）或谷草转氨酶（ASAT/AAT）。它促进天冬氨酸、酮戊二酸转换成草酰乙酸和谷氨酸盐。人体内有两种同工酶，GOT1是一种胞浆同工酶，常见于血红细胞和心脏中。GOT2是线粒体同工酶，主要在肝脏中。肝脏和肌肉发生病变的时候AST会升高，是肝能、心肌梗死、急性胰腺炎、急性溶血性贫血、严重烧伤、急性肾功能疾病和创伤的辅助诊断指标之一。  
 
简单、直接、自动化的AST活性检测手段在科研及药物研发中受到了广泛应用。本公司生产的天冬氨酸转氨酶测试盒是基于AST产出的草酰乙酸盐的量来测定的。该反应中，苹果酸脱氢酶把草酰乙酸和NADH转化成苹果酸和NAD。NADH的吸光率在340nm处的降低与AST的活性成正比。
 
产品特点
敏感：检测范围 2–100 U/L。 
简单、方便：该测试方法可在微孔板和比色皿中进行，反应仅用10分钟。
 
适用范围
直接检测：血浆、血清和其他生物样本中的AST活性。
药物研发/药理学：药物对AST活性的影响。
 
试剂盒组成（96孔板供100份检测）

缓冲液：24mL	辅酶：120 µL
酶混合物：120 µL	NADH: 500µL

 
储藏条件：试剂盒冰上运输。所有试剂在-20°C下保存。
预防措施：本产品仅供研究用。使用过程中严格遵循实验安全措施。
 
检测步骤
将所有试剂放置至室温，酶试剂放在冰上。
检测可在37℃或室温下进行，实验之前，把工作试剂，微孔板，分光光度计调到所需的温度。
血清或血浆（肝素，EDTA抗凝）样品应清晰，无颗粒或沉淀物。溶血样品不得使用。
 
96孔板测定步骤 
1. 样品和空白对照： 转移20 mL样品到每个孔中。每个孔板应包含2个装有20 mL蒸馏水的孔，用来做NADH的标准和空白对照。让孔板保持在设定的温度（e.g. 37℃）。
 
2. 为样品和标准孔准备工作试剂。按每个孔需要200 µL缓冲液，1 µL辅酶，1 µL酶混合物，4 µL NADH的比例配制足够量的工作试剂。并预热到设定的温度（e.g. 37℃）。
为空白孔配制空白对照试剂，混合200 µL缓冲液，1 µL辅酶，1 µL酶混合物，4 µL 水。并预热到设定的温度（e.g. 37℃）。
 
3. 在标准和样品孔加200 µL工作试剂，在空白孔加200 µL空白对照试剂。
 
迅速轻敲孔板混匀，在设定的温度下反应，记录反应5分钟和10分钟时340nm处的吸光值，或者记录动力学反应值。
 
比色皿测定步骤
1. 每个检测应包含一个标准品和一个空白对照。

为样品和标准液的比色皿准备工作试剂，按每个比色皿需要1000 µL缓冲液，5 µL辅酶，5 µL酶混合物，20 µL NADH的比例配制足够量的工作试剂。转移990 mL工作试剂到每个样品和标准的比色皿中。并预热到设定的温度（e.g. 37℃）。   对于空白对照试剂的比色皿，混合960 µL缓冲液，5 µL辅酶，5 µL酶混合物，20 µL 水。预热到设定的温度（e.g. 37℃）. 2. 把样品预热到设定的温度，转移100µL样品到样品比色皿中，并分别转移100µL水到标准品和空白对照的比色皿中。 3. 迅速混合。记录反应5分钟和10分钟时340nm处的吸光值，或记录动力学反应值。   浓度计算 每个样本，用反应在5分钟的OD值减10分钟的OD值，计算NADH的消耗(DODS)，同样的方法(OD5min - OD10 min).计算标准品的消耗(DODNADH)。 用下面的公式计算AST的活性：   ODSTD 和 ODBLK分别是反应5分钟时NADH标准品和空白对照在340nm处的吸光值。388是由下面的公式得出的。   如果计算出的AST的活性高于100U/L，用缓冲液稀释样品，结果乘以稀释倍数。   实验必需品(未提供) 移液装置和配件，透明平底96孔板、阅读仪和分光光度仪测OD值。   纯化的AST酶（37℃测试） 参考文献 1. Bergmeyer H.U. et al (1978). Optimization of methods for aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase. Clin. Chem. 24(1): 58-73.   2. Bowers Jr G.N. and McComb R.B. (1984). A unifying reference system for clinical enzymology: aspartate aminotransferase and the International Clinical Enzyme Scale. Clin. Chem. 30(7): 1128-1136.   3. Siest G. et al. (1975). Aspartate aminotransferase and  alanine aminotransferase activities in plasma: statistical distributions. Clin Chem. 21(8):1077-87.