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- 泽叶生物
- ZY2030
- 中国/上海
- 2025年12月10日
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大量
- 英文名：
MG1655 Chemically Competent Cell
- 保质期：
6个月
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
100μl/支
MG1655 Chemically Competent Cell 产品说明书
产品规格（CAT#: ZY2030）
MG1655： 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（6个月）
基因型
K12 F- lambda- ilvG- rfb-50 rph-1
产品说明
MG1655菌株来源于W1485，是K12的衍生菌株，是一种经过较少改造，比较接近于“WT-野生型”的大肠杆菌工程菌株。MG1655外观形态标准，同时可做为扩增大肠杆菌WT型基因的模板使用，也可作为蛋白表达的宿主菌株使用，但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液尽量去除核酸酶，以防提取的质粒被降解。pUC19质粒检测转化效率>0.5×108 cfu/μg DNA。
操作方法
1. MG1655感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15 h。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
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文献和实验7 的缓冲液来洗脱；洗脱液提前预热至 65℃ 也可以提高洗脱效率。 3. 提取质粒转化大肠杆菌效率低 大肠杆菌转化效率受到多种因素的影响，例如感受态细胞状态，转化方式及操作（电转或热激），质粒用量，质粒质量等等。从感受态角度优化，可以考虑感受态本身的状态，比如贮存时间、贮存方式不当会导致感受态转化效率明显降低，此外热激条件也会影响感受态转化效率，建议热激时间严格按照感受态类型或说明书操作。从质粒角度优化，可以进一步确认质粒用量，质粒浓度，质粒是否降解等。 4. 提取质粒转染细胞效率低
。 Alfa互补 实验仪器、材料与试剂 (一)仪器 1. 恒温摇床 2. 超净工作台 3. 恒温水浴锅 4. 恒温箱 5. 微量取液器 (二)材料 1. 实验四所得连接产物 2. 实验五制备的大肠杆菌感受态细胞 (三)试剂 1. LB固体培养基 2. 氨苄青霉素(Amp) 100mg/ml 实验步骤 转化
的质量和用量：测定的最高转化效率的数值来自1 ml的0.01 ng/ml超螺旋pUC18 DNA转化100 ml 感受态细胞的实验结果。转化连接产物时，每100 ml细胞要求2 ml连接反应产物。通过使用50 ng DNA可以得到更多的克隆，但同时转化效率(cfu/mg) 有所降低。DNA溶液的体积可以增至总转化体系体积的10%，但是转化效率也相应降低。热激时间和温度: 最优的转化结果是采用42℃热激30秒。热激40秒均造成效率降低。温度不可超过42℃。5、蓝-白斑筛选：特定重组质粒的蓝白斑筛选要求
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