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- 泽叶生物
- ZY1070
- 中国/上海
- 2025年12月10日
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大量
- 英文名：
DH10B Chemically Competent Cell
- 保质期：
6个月
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
100μl/支
DH10B感受态细胞（热激 ）
DH10B Chemically Competent Cell 产品说明书
产品规格（CAT#: ZY1070）
DH10B： 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（6个月）
基因型
F- mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara, leu)7697 galE15 galK λ- rpsL nupG
产品说明
DH10B菌株来源于MC1061菌株，mcrA、mcrBC及mrr突变使DH10B菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA (Therefore , genomic DNA , both prokaryotic and eukaryotic, can be cloned efficiently in DH10B)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。φ80lacZ∆M15 marker的存在使DH10B可用于蓝白斑筛选，rpsL赋予其链霉素抗性。DH10B感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>108cfu/μg DNA。
操作方法
1. DH10B感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少13小时。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
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文献和实验Prior to getting cells:1) Turn on 42 deg bath. Takes about 30 min to reach 42 deg.2) Put 0.1 M sterile CaCl2 on ice.3) One tube of cells is good for several transformations.For two transformations:1) Put 10 μl of your ligation
(Meselson68) 2. nalidixic acid resistant DH10B F- endA1 recA1 galU galK deoR nupG rpsL ΔlacX74 Φ80lacZΔM15 araD139 Δ(ara,leu)7697 mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) λ- 1.suitable for cloning
相关专题 准备工作： ①制做选择平板LB+25 mg/l Kan。 ②核对好要转化的质粒 DNA，在15 ml Falcon tube 和cuvette（电转化用的石英样品槽，两面磨光，两面磨砂）标好质粒名称。将Falcon tube、cuvette、质粒DNA、SOC培养基按顺序对应置于冰上预冷或解冻。转化前将大肠杆菌（45 µl aliquot of E. coli DH10B Cell s）置于
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