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- 泽叶生物
- ZY1035
- 中国/上海
- 2025年12月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
XL2-Blue Chemically Competent Cell
- 保质期：
6个月
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
100μl/支
XL2-Blue Chemically Competent Cell 产品说明书
产品规格 （CAT#: ZY1035）
XL2-Blue: 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（6个月）
基因型
TetR Δ(mcrA)183 Hte [F´ {proAB lacIq lacZΔM15 Tn10 (TetR) Amy CamR}] Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1
产品说明
XL2-Blue菌株来源于XL1-Blue菌株，为Hte (high transformation efficiency)基因型，Hte是Stratagene开发的特异性提高感受态转化效率及大质粒转化能力的宿主菌基因型，已成功应用于40 kd质粒的构建。Hte使得XL2-Blue适用于大质粒DNA和重组产物的转化，降低片段大小的偏爱性，多用于文库构建。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。hsdSMR突变导致EcoK核酸内切酶系统缺失，增强了外源DNA的稳定性和提取质量。lacZΔM15的存在使XL2-Blue菌株可用于蓝、白斑筛选。此菌株具有四环素和氯霉素抗性。XL2-Blue感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>109 cfu/μg DNA。
操作方法
1. XL2-Blue感受态细胞从
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少14 h。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
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文献和实验7 的缓冲液来洗脱；洗脱液提前预热至 65℃ 也可以提高洗脱效率。 3. 提取质粒转化大肠杆菌效率低 大肠杆菌转化效率受到多种因素的影响，例如感受态细胞状态，转化方式及操作（电转或热激），质粒用量，质粒质量等等。从感受态角度优化，可以考虑感受态本身的状态，比如贮存时间、贮存方式不当会导致感受态转化效率明显降低，此外热激条件也会影响感受态转化效率，建议热激时间严格按照感受态类型或说明书操作。从质粒角度优化，可以进一步确认质粒用量，质粒浓度，质粒是否降解等。 4. 提取质粒转染细胞效率低
的ElectroTen-Blue®电转化感受态细胞，单次反应包装的SoloPack® Gold，以及XL2-Blue MRF´ ，XL1-Blue MRF´ Kan（四环素抗性质粒），XL1-Blue MR（没有F´附加体），克隆有二级结构的SURE细胞等。重点推荐 Stratagene的ElectroTen-Blue（转化效率>3×1010 ）和Novagen的Nova XG Zappers（转化效率>1×1010 ）电转化感受态细胞均具有endA－基因型，保证质粒优质高产；recA－重组缺陷基因型适合
：细胞经 1000 rpm离心 10分钟会聚集，应将细胞沉淀用 200 *l NZY+ 肉汤重悬。如果用于铺板的细胞 11、 37°C培养过夜。颜色筛选请参见以下Blue-White Color Screening的操作指南。12、 pUC18阳性对照预计有约250个克隆（?5 × 109 cfu/mg pUC18 DNA）。而样品DNA的转化效率随DNA的量和组成（超螺旋或连接产物）有较大差异，大质粒和非超螺旋DNA往往得到较少的克隆。（适用于Stratagene和Novagen化学法制备的感受态细胞）
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