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- BI
- 2025年12月25日
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- 供应商：
上海研卉生物
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大量
- 规格：
MSC无血清基础培养基+MSC添加剂
货号：05-200-1A/B 基础培养基，05-201-1U/06营养添加物
规格：500ml/瓶，100ml/瓶 基础培养基；3ml/瓶，0.6ml/瓶 基础添加物
产品名称：MSC NutriStem® XF Medium 无血清培养基
间充质干细胞无血清培养基
MSC NutriStem® XF Medium
产品说明书：
一、目的：利用间充质干细胞无血清培养基培养分离脐带间充质干细胞。
二、材料：新生儿脐带
三、主要仪器：医用手术器械，生物安全柜，CO2培养箱，6孔培养板，T25培养瓶
四、试剂：
表1 MSC NutriStem® XF Medium
| 用途 |
品牌 |
货号 |
名称 |
规格 |
保存条件 |
| MSC培养基 |
Biological Industries |
05-200-1A |
MSC NutriStem® XF Basal Medium MSC无血清基础培养基 |
500ml |
4℃ |
| Biological Industries |
05-201-1U |
MSC NutriStem® XF Supplement MSC无血清添加剂 |
3ml |
-20℃ |
|
| 细胞贴壁 |
Biological Industries |
05-752-1H |
MSC Attachment solution (100X) MSC贴壁试剂 |
1 ml |
4℃ |
| Biological Industries |
05-760-1-15 |
NutriCoat™ Attachment solution (500X) NutriCoat™贴壁试剂 |
1.5ml |
RT |
|
| Biological Industries |
PLTGOLD010R | PLTGold® Human Platelet Lysate 血小板裂解物** |
10ml | -20℃ | |
| **已知血小板裂解物含有大量的外泌体，用户可依照实验目的选用合适的贴壁试剂。 |
|||||
| 细胞传代 |
Biological Industries |
03-079-1A |
Recombinant Trypsin-EDTA Solution 重组胰酶-EDTA |
500ml |
RT |
| Biological Industries |
03-048-1C |
Soybean Trypsin Inhibitor (50X) 大豆胰酶抑制剂 |
20 ml |
-20℃ |
|
| Biological Industries |
02-023-1A |
DPBS (w/o Ca & Mg) |
500 ml |
RT |
|
| DPBS缓冲液 |
|||||
| 辅助试剂 |
Biological Industries |
05-713-1B |
NutriFreez® D10 Cryopreservation Medium |
100 ml |
4℃ |
| D10 冻存液 |
|||||
| Biological Industries |
03-031-1B |
Penicillin-Streptomycin Solution (100X)青链双抗 |
100ml |
-20℃ |
|
| Vivacell | C35010010 | MSC ACF Tissue Digestive Mix 高效原代干细胞分离液 |
100m | -20℃ | |
五、实验前准备：
5.1完全培养基的准备
5.1.1冻存的MSC NutriStem® XF Supplement在室温或2-8℃解冻，避免反复冻融。
5.1.2配制：MSC NutriStem® XF Basal Medium（培养基）：MSC NutriStem® XF Supplement（添加物）：青链双抗=500ml：3ml：5ml，4℃保存，2周内使用。
注1：双抗非必须，建议原代（P0）时使用。
注2：培养基含L-Glutamine，贮藏时避免长期照光。
5.2包被培养皿
或跳过此步骤，直接加2%血小板裂解物，促进MSC细胞贴壁与生长。
如果使用05-752-1H，参考如下步骤：
5.2.1使用DPBS溶液（BI, Cat# 02-023-1A），将MSC贴壁试剂稀释100倍（1:100）。
5.2.2参照表3，加入适量的1X MSC贴壁试剂涂层培养皿或板。
表3 涂层过程中贴壁试剂建议使用量（05-752-1）
| 培养器皿 |
表面积cm2/孔或瓶 |
1X MSC贴壁试剂使用体积 |
| 96孔板 |
0.34 |
0.05~0.1 ml |
| 24孔板 |
1.9 |
0.2~0.4 ml |
| 12孔板 |
3.9 |
0.4~0.8 ml |
| 6孔板/ 35 cm培养皿 |
9.6 |
1~2 ml |
| T25瓶/ 60 cm培养皿 |
25 |
2.5~5 ml |
| T75瓶 |
75 |
7.5~15 ml |
注1：涂层的培养皿需在无菌条件下2℃-8℃储存，需在一周内使用。（标示红色为原厂建议使用量，经过实验测试后可减半使用）
注2：包被期间， 注意包被液不可以干掉！
5.2.3轻轻摇动培养皿，确认贴壁试剂均匀分布在培养皿表面后，用封口膜包裹涂层的培养皿。
5.2.4在2-8℃孵育过夜；或者在CO2培养箱，37℃，至少孵育30分钟。
5.2.5接种前, 吸除贴壁试剂，再用DPBS轻轻冲洗培养皿，即可接种细胞。
如果使用05-760-1-15，参考如下步骤：
5.2.1使用生理盐水，将NutriCoat™ 促贴壁试剂稀释500倍（1:500）。
5.2.2参照表4，加入适量的1X NutriCoat™ 促贴壁试剂涂层培养皿或板。
表4 涂层过程中贴壁试剂建议使用量（05-760-1-15）
| 培养器皿 |
表面积cm2/孔或瓶 |
1X NutriCoat™ 促贴壁试剂使用体积 |
| 96孔板 |
0.34 |
0.1 ml |
| 24孔板 |
1.9 |
0.5 ml |
| 12孔板 |
3.9 |
1 ml |
| 6孔板 |
9.6 |
2.5 ml |
| T25瓶 |
25 |
6.5 ml |
| T75瓶 |
75 |
19 ml |
注1：涂层的培养皿需在无菌条件下2℃-8℃储存，需在一周内使用。
注2：包被期间，注意包被液不可以干掉！
5.2.3轻轻摇动培养皿，确认贴壁试剂均匀分布在培养皿表面后，用封口膜包裹涂层的培养皿。
5.2.4在2-8℃孵育过夜；或者在CO2培养箱，37℃，至少孵育1小时。
5.2.5接种前, 吸除贴壁试剂，用DPBS轻轻冲洗培养皿（或不需要清洗），即可接种细胞。
5.3制备1X大豆胰酶抑制剂
5.3.1使用无菌的DPBS，将50X大豆胰酶抑制剂（03-048-1C）稀释成1X。
注1：抑制重组胰酶消化建议方法：第一种使用大豆胰酶抑制剂；第二种使用PBS/DPBS清洗（2倍重组胰酶量）吹打, 离心去上清；第三种使用维持培养基抑制。
六、使用范例：
6.1 UC-MSC原代培养 （组织块法）
6.1.1无菌条件下取新鲜脐带，用DPBS漂洗净血迹
注1： 一般脐带取得非无菌环境，可以稍微用75%酒精润洗。
6.1.2置10cm 培养皿中，剪成1~2cm脐段，剔除血管，用DPBS洗净血迹，再剪成1mm3组织块。(图 1)
6.1.3用无菌滴管吸取少量细小组织块均匀散布在 6 孔板 2 个孔中。
6.1.4 37℃，5%CO2培养箱孵育 30min，以使组织块粘贴在培养皿壁上。
6.1.5 向每孔滴加0.8ml 完全培养基 (注意沿孔壁小心滴加，勿使冲动组织块)。
6.1.6 37℃，5% CO2 培养箱孵育过夜，次日 (D1) 每孔再补加1ml 完全培养基。
6.1.7 37℃，5% CO2 继续培养，5天 (D6) 后半量换液 (此时一般看不到细胞，但最快3天就可看到细胞从组织边沿爬出)。
6.1.8再过5天后半量换液 (此时一般会有细胞爬出，但最晚可到14天会出现细胞从组织边沿爬出) (图2、图3)。
6.1.9每2天换一次培养液，继续培养2~4天，待细胞融合度（Confluency）达到约80%后传代培养(图4)。
注1：组织块培养的关键是要保障组织块始终贴壁，换液动作要尽可能轻微，避免冲动组织块。培养基加量不能太多，以免组织块漂浮。
注2：为增加成功率，从原代分离脐带和脂肪间充质干细胞,培养基可加2.0 % PLTGold® 血小板裂解物。
6.2 UC-MSC原代培养 （消化法）
MSC NutriStem® 无血清培养基也能有效地培养消化法取得的原代细胞，操做方式如下：
6.2.1 将脐带用DPBS漂洗干净，剪成1-50px,后剔除血管。
注1：一般脐带取得非无菌环境，可以稍微用75%酒精润洗。
6.2.2将组织剪成3-5mm3后，移入50ml离心管，再加入的分离液。
注1：一条长度10公分的脐带建议加入10ml的分离液；或者组织块 : 分离液（vol）= 1:1。
注2： 视情况而定，可自行在分离液中添加1%青链双抗（BI, Cat# 03-031-1B）。
6.2.3把50ml离心管横放在37度细胞培养箱，过夜反应（16小时）。
注1：若总反应体积较大，也可持续旋转混合。
6.2.4加入和分离液等体积的0.05%EDTA（BI, Cat#03-015-1B）终止反应后，1500 xg离心5分钟，去除上清。
注1：溶液比较浓稠，小心不要影响下层的细胞;建议留下5ml左右的溶液。
注2： 若是脂肪组织，没有粘稠的情形，以常规的200-300 xg离心即可。
注3：没有EDTA, 可使用无钙镁DPBS取代；此时建议后面步骤6多重复2-3次，以确实去除酵素。
6.2.5以和分离液等体积的无钙镁DPBS重悬细胞后，500 xg离心5分钟，去除上清。
6.2.6再次以和分离液等体积的无钙镁DPBS重悬细胞后，250 xg离心5分钟，去除上清。
6.2.7用适量的培养基重悬细胞后，即可按常规细胞培养方法接种P0代细胞培养。
注1：消化后的原代细胞，建议培养时接种密度提高到10,000/cm2以上；传代后即可按常规的接种密度培养。
6.3 UC-MSC传代培养与冻存
6.3.1待细胞融和度达到约80%后进行传代（细胞不能太密集，否则容易分化），吸弃传代板孔中的培养基，每孔加适量DPBS轻轻冲洗1次。
6.3.2根据培养皿适量加入重组胰酶-EDTA（货号：03-079-1A，T25建议使用1ml），在37℃，5% CO2培养箱作用3~5 min（可轻拍培养瓶帮助细胞脱落）。
6.3.3显微镜下观察细胞完全脱落后，使用5-10ml稀释大豆胰酶抑制剂（SBTI, 货号：03-048-1，1X），1000rpm离心3~5min。
6.3.4谨慎吸出上清，细胞团块用适当体积的完全培养基悬浮后，混匀细胞悬液。
6.3.5按照所需的比例进行传代或按照5000-6000cells/cm2的细胞密度将细胞接种至培养器皿中，放入37℃, 5% CO2培养箱内培养。
6.3.6每2-3天更换一次培养基，待细胞融合度达到80%左右时，参照操作步骤6.3.1~6.3.5做细胞传代；或者参照操作步骤6.3.1~6.3.3收获细胞冻存。
6.3.7细胞冻存：将细胞团块悬浮于适量 (0.5~1×106cells/ml) D10无血清 冻存液（货号：05-713-1）中，装入冻存管，2~8℃冰箱放置30min，-80℃冰箱放置 24h，转入液氮罐冻存。
注1：本方法仅供参考，用户可根据自身经验做合理调整。
附图：（如下是组织块法，建议客户可以尝试消化法）
图1剔除脐带3根动静脉血管 图2细胞从组织块边沿爬出
图3细胞快速增殖 图4传代时机成熟
产品官网链接：https://www.bioind.com/worldwide/nutristem-msc-medium/
相关产品
MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium间质干细胞成骨诱导分化培养基
货号：05-440/05-442
规格：100ml
产品名称：MSCgo™间充质干细胞成骨/快速成骨诱导分化试剂
产品描述
MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium间质干细胞成骨诱导分化培养基，无血清，无异源，即用型完全培养基，诱导hMSC分化为成熟成骨细胞。适用于不同来源的hMSC，如骨髓、脂肪组织和脐带组织（hMSC-BM，hMSC-AT，hMSC-CT）。
MSCgo™ Rapid Osteogenic Differentiation Medium 10天以内快速诱导成骨，而MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium需要14-21天。
成骨结果
hMSC分化成骨后会矿化形成钙结节且有钙分泌，所以可以利用茜素红S (Alizarin Red S) 染色检视分化的成骨细胞。不同的细胞来源（类型、年龄、代数）所得到的分化效果会有差异
试剂盒组成
MSCgo™间质干细胞成骨诱导分化培养基
| 产品描述 | 储存 | 货号 | 规格 |
| MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium |
2-8°C | 05-440-1B | 100ml |
| MSCgo™ Rapid Osteogenic Differentiation Medium | 2-8°C | 05-442-1B | 100ml |
成骨实验所需材料
维持培养基
MSC NutriStem® XF Medium: BI；05-200-1，05-201-1
MSC Attachment solution XF: BI；05-752-1，05-760-1
注：若是血清体系、血小板体系或其他MSC培养体系也可以使用。
分化培养基
MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium：BI；05-440-1
MSCgo™ Rapid Osteogenic Differentiation Medium：BI；05-442-1
染色试剂
建议使用Vivacell品牌，间充质干细胞成骨分化染色试剂盒，货号：C37C0-0150。
成骨诱导分化操作
1 接种hMSC：用MSC Attachment solution (BI；P/N: 05-752-1，1:100 DPBS 稀释) 预包被24孔盘，每孔加入0.5ml MSC NutriStem® XF，接种6x104细胞 (3x104 cells/cm2)。
此处仅为针对成骨诱导的细胞接种操作，MSC NutriStem® XF Medium详细操作步骤请参考其说明书。
若使用血清体系、血小板体系或其他MSC培养体系，可以略过包被步骤。
2 置于37°C，5% CO2细胞培养箱中培养。
以成骨分化培养基诱导分化
1 培养24h后确认细胞融合度达到80-90%，将维持培养基吸除，每孔（24孔盘）加入0.5ml分化培养基。
若细胞融合度<80%，继续再培养一天。
2 置于37°C，5% CO2培养箱中培养10-21天，每2-3天换液。
培养时间越长，会有越多矿化的细胞，ARS染色更明显。
3 成骨评价：使用2%的ARS染色液。
染色步骤
间充质干细胞成骨分化染色试剂盒 英文名称：MSC Osteo-Staining Kit
【预期用途】
适用于间充质干细胞成骨分化后的骨细胞染色，尤其适合作为BI MSCgoTM Osteogenic XF ( BI 05-440-1B 或 05-442-1B) 成骨分化后的染色验证之用。
【检验原理】
茜素红S (Alizarin Red S)是一种常用的示钙染剂，广泛用作生物医学样本中含钙目标物的染色检验。游离的钙离子可与茜素红S形成红色沉淀；固着的钙则会被直接染成红色。
在成骨诱导分化作用下，间充质干细胞 (MSC, Mesenchymal Stem Cell) 会被逐渐分化为骨细胞(Osteoblasts)，包括钙化骨节(钙盐结晶体)的形成 (Calcium nodules formation) 和细胞的泌钙反应 (Calcium secretion)。两者均可被茜素红S染成红色。
【检验方法】
以操作一个T25 flask为例：
1. 吸弃分化培养基，加入1 ml DPBS (BI 02-023-1ACS) 轻轻润洗培养瓶底面。
2. 吸弃DPBS，加入3 ml Fixation solution (C37C10020)，轻轻晃动培养瓶，使底面浸润均匀。室温下静置30 分钟。
3. 吸弃Fixation solution；加入3 ml Wash I (C37C20050)，润洗细胞2-3次。
4. 吸弃Wash I，加入3 ml Staining Solution (C37C30020)，底面浸润均匀，室温染色30分钟。5. 吸弃Staining Solution，加入3 ml Wash II (C37C40050)，润洗细胞2-3次。
6. 吸弃Wash II，加入1 ml Inspection Solution (C37C50010)，置于显微镜下观察、拍照 (分化后的骨细胞会被染成橘红色)。
【检验结果的解释】
在显微镜下，可观察到钙化骨节与茜素红染料结合后呈现红色或橘红色(如下图所示)。被染色细胞的数量和染色的深度会受到多种因素的影响，例如：细胞类型、细胞代数、分化时间和培养条件等。
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- 内容
- 询问日期
文献和实验boboshining 慢病毒转染人间充质干细胞的效率是多少啊？谢谢 kinguangjun 我做过用慢病毒感染人脐带血间充质干细胞和人脂肪间充质干细胞,其感染效率大概在50%～80%之间,人脐带血间充质干细胞比人脂肪间充质干细胞的感染效率要高一些. 易冰 我现在也很想知道，慢病毒是不是转染有种属性质，我用构建好的慢病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞，基本上没有多少转染成功的。
相关专题 细胞培养基的配制 Invitrogen公司宣布推出一种无血清 培养基(SFM)，专门用于间充质干细胞(MSC)或来源于骨髓的干细胞的培养。STEMPRO MSC SFM是第一个此类产品，克服了MSC培养中的许多难题。同时，Invitrogen还推出两个试剂盒，让MSC分化成脂肪细胞或骨细胞。 MSC有着治疗上的应用，但迄今为止，它们的体外培养都需要包含动物来源血清的培养基 。含血清的培养基有着不确定的因素
体，后续培养后收集的细胞上清中的外泌体不确定是从细胞分泌的还是血清中来的，影响结果的准确性。 2. 营养：细胞培养是需要一定的营养的，那么如果不加血清，单独只用基础培养基，就会导致细胞处于饥饿状态，严重影响细胞生长，甚至出现吞噬外泌体的现象，影响实验结果。 3. 杂蛋白：去外泌体胎牛血清可以很好地解决 1、2 中涉及的问题，但还会存在杂蛋白影响蛋白定量结果，导致数据偏高，影响后续实验的准确性。如果使用外泌体专用无血清培养基（专门针对外泌体获取的培养基，化学成分明确，类似于完全培养基的一种
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