显影液定影液套药

western-blot实验方法

1、试剂耗材的准备：（1）转膜缓冲液（48 mM Tris-HCl，39 mM 甘氨酸，0.037% SDS，20%甲醇）：（2）10 × 丽春红染液：（3）TBS 缓冲液：（4）TBST 缓冲液（含20%Tween20 的TBS 缓冲液）：（5）封闭液（含5%脱脂奶粉的TBST 缓冲液）：（6）一抗、二抗及抗体稀释液：参照说明书，以封闭液或TBST 进行稀释。（7）底物显色液ECL，4℃ 避光保存，现用现配。（8）显影液和定影液用水稀释10 - 20 倍于铝盒中，可多次使用。室温避光存放

操作篇：western blot 之发光鉴定

一般使用辣根过氧化物酶 HRP-ECL 发光法或碱性磷酸酶 AP-NBT/BICP 显色法。 1．HRP-ECL 发光法： 将 A、B 发光液按比例稀释混合。膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于 A、B 混合液滴上，熄灯至可见淡绿色荧光条带（5 min 左右）后滤纸贴角吸干，置于保鲜膜内固定于片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒，根据所见荧光强度曝光。取出胶片立即完全浸入显影液中 1～2 min，清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影，清水冲净晾干，标定

细胞显微摄影

完毕。 6．拍摄记录 (三)黑白胶片的冲印 感光胶片在拍摄完毕后，需尽快在暗室中冲洗和晒印，其方法和普通照像相似。其基本原理是显影液使胶片已感光的银盐潜影还原为可见的金属银影像；停影液使显影液失去显影能力，防止显影过度与斑痕出现；定影液把未被还原的卤化银溶去，晾干是便于胶片和相纸保存。 1．冲印的操作步骤 (1)把胶片装入显影罐中(切勿粘在一起)先用清水冲洗，排除气泡．然后再把水倒掉，这有利于显影液的快速均一作用。