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Goat anti-Human IgA(α-chain specific)
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20
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上海吉至生化科技有限公司
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无
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,1ml
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文献和实验胶体金标记蛋白质的原理,一般认为是由于pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电点时,蛋白质呈电中性,此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小,但蛋白质分子的表面张力却最大,处于一种微弱的水化状态,较易吸附于金颗粒的表面。由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面,形成一个蛋白层,阻止了胶体金颗粒的相互接触,而使胶体金处于稳定状态,如果=低于蛋白质的等电点时,蛋白质带正电荷,胶体金带负电荷,二者极易静电结合形成大的聚合物。如果pH高于蛋白质等电点时,蛋白质带负电荷,与金颗粒的负电荷相互排斥而不能互相
银染色法(Dot-Immuno-Gold-Silver Straining Method,Dot-IGSS),利用NC膜可以与带负电荷的蛋白质产生较强的疏水作用,从而使目标蛋白与NC膜产生较强亲和力的特性,以及NC膜易于被封闭的特点,使用NC膜作为固相载体。先使被FMDV免疫过的牛血清(含FMDV抗体蛋白)与NC膜结合,然后使用合适的封闭液将NC 膜未结合蛋白的位点封闭,再用胶体金标记过的抗FMDV抗体蛋白的二抗与FMDV免疫过的牛血清作用(利用抗原抗体的特异性结合反应),将未特异性结合的蛋白
当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后,便可进行标记。具体步骤如下。(1)根据标记所用胶体金的总量计算出所需要待标记蛋白质的总量。(2)边搅拌边将蛋白质溶液加入胶体金溶液中,逐渐加入,lmg的蛋白质量大约需5min,或在搅拌下将胶体金逐渐加入到蛋白质溶液中,大约需5~10min。(3)继续搅拌10min,然后加入5%BSA使其终浓度为1%,或加入3%聚乙二醇(PEG,Mr:20000)使其终浓度为0.05%,其效果BSA要优于PEG。(4)将标记好的胶体金装入透析袋中,两头扎紧,放
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