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Goat anti-Human IgM(μ-chain specific)
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上海吉至生化科技有限公司
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无
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文献和实验胶体金标记蛋白质的原理,一般认为是由于pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电点时,蛋白质呈电中性,此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小,但蛋白质分子的表面张力却最大,处于一种微弱的水化状态,较易吸附于金颗粒的表面。由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面,形成一个蛋白层,阻止了胶体金颗粒的相互接触,而使胶体金处于稳定状态,如果=低于蛋白质的等电点时,蛋白质带正电荷,胶体金带负电荷,二者极易静电结合形成大的聚合物。如果pH高于蛋白质等电点时,蛋白质带负电荷,与金颗粒的负电荷相互排斥而不能互相
银染色法(Dot-Immuno-Gold-Silver Straining Method,Dot-IGSS),利用NC膜可以与带负电荷的蛋白质产生较强的疏水作用,从而使目标蛋白与NC膜产生较强亲和力的特性,以及NC膜易于被封闭的特点,使用NC膜作为固相载体。先使被FMDV免疫过的牛血清(含FMDV抗体蛋白)与NC膜结合,然后使用合适的封闭液将NC 膜未结合蛋白的位点封闭,再用胶体金标记过的抗FMDV抗体蛋白的二抗与FMDV免疫过的牛血清作用(利用抗原抗体的特异性结合反应),将未特异性结合的蛋白
/540nm=1.5左右为宜,以 0.5mg/ml叠氮钠防腐,置4℃保存。⑥包被后的金溶胶也可浓缩后于Sephadex G-200柱进行凝胶层析分离纯化,以含 0.1%BSA的缓冲溶液洗脱。通常用IgG包被的金溶胶洗脱液pH为8.2,以A蛋白包被的金溶胶洗脱液为pH7.0.以上操作中应注意,一切溶液中不应含杂质微粒,可用高速离心或微孔滤膜预处理。4、胶体金标记蛋白的纯化(1)超速离心法:根据胶体金颗粒的大小,标记蛋白的种类及稳定剂的不同选用不同的离心速度和离心时间。用BSA做稳定剂的胶体金—羊抗
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