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- 百奥莱博
- BTN140384-OHU
- 北京
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
85
- 英文名：
E.coli GV3101 Chemical Competent Cell
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
10×100μL
特别提示：包括农杆菌GV3101化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：农杆菌GV3101化学感受态细胞
英文名称：E.coli GV3101 Chemical Competent Cell
产品货号：BTN140384
产品规格：10×100μL
本产品为GV3101农杆菌化学感受态细胞，其具有利福平和庆大霉素抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率高达104cfu/μg。
基因型：C58(rifR)Ti pMP90(pTiC58DT-DNA)(gentR/strepR)Nopaline。
储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期一年。
自备试剂：质粒DNA、液氮等
使用方法：
转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在 28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化。
2. 无菌条件下，向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒，每100μL感受态细胞加1μg质粒DNA，轻柔混匀。冰水浴中静置10分钟。
3. 将离心管置于液氮中速冻 5分钟(注：也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮)。
4. 迅速将离心管置于37℃水浴静置中5分钟，不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置5分钟。
5. 加入800μl 无抗生素的2×YT或LB液体培养基，28-30℃振荡培养2~3小时。使菌体复苏，表达抗性。
6. 5000rpm离心1分钟收菌，保留100μl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，均匀涂布到含有相应抗生素的LB 固体培养基平板上，待平板中的液体完全吸收后，倒置平板，28-30℃培养48-72小时。
注：当平板只含有50μg/mL kan时，28℃培养48小时即可；平板中同时加入50μg/mL kan，20μg/mL rif时，需 28℃培养 60h；如果使用的平板含有50μg/mL rif 则需要 28℃培养 72-90小时。
注意事项：
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10 ；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少zuì终用于涂板的菌量。
4. 利福平浓度不应高于25μg/μL，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有 50μg/mL kan，若所用平板含有 20μg/mL rif 则转化效率降低到1/2。
5.培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止 Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。
6.相关抗生素配方：
| 抗生素 | 配方 | 原液 | 工作液 |
| 羧苄青霉素(carb) | 双蒸水溶解 | 50mg/mL | 50μg/mL |
| 硫酸卡那霉素(kan) | 双蒸水溶解 | 50mg/mL | 50μg/mL |
| 链霉素(strep) | 双蒸水溶解 | 10mg/mL | 50μg/mL |
| 利福平(rif) | DMSO溶解 | 10mg/mL | 20μg/mL |
| 庆大霉素(gent) | 双蒸水溶解 | 20mg/mL | 40μg/mL |
我公司销售的农杆菌GV3101化学感受态细胞现货供应，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验Agrobacterium growth and transformation (农杆菌培养及转化)
Growth and storage of Agrobacterium tumefaciens(农杆菌培养及转化) Strain GV3101: resistant to gentamycin and rifampicin so add 25-50 ug/ml Gentamycin, 10 ug/ ml rifampicin on plates or in liquid media for selection. GV3101
1. 50 ml 离心管 2. 光谱仪 3. 紫外灯 4. 荧光显微镜 四、步骤 1. 挑取单克隆于5 ml LB液体培养中，28~30°C震荡培养。通常，LB中加入100 ug/ml 庆大霉素（农杆菌株GV3101携带抗性），50 ug/ml 大观霉素（载体携带）。 2. 将1 ml 过夜培养的农杆菌转接到25 ml LB液体培养基中（加有与1相同的抗生素，另外加入高压灭菌的乙酰丁香酮）。 3. 检测过夜培养的菌液OD600的值。 4. 5000 g，15
或宿主菌 请问pucm-t载体能否用JM109转化？ 转化后问题 请教一个关于转化后筛选的问题 求助！鉴定转化产物 感受态细胞 请教各位化学转化的感受态细胞 [/如何制作转化效率高的BJ5183化学感受态 HANAHAN法制备高频转化的感受态细胞是不是非常脆弱啊? 讨论细菌转化时热休克的作用（结果update） 转化过程中的外源DNA吸收机制 转化效率 怎样计算转化效率？ 求教转化效率如何计算？ 请教－这是否是转化率的问题
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