多糖多酚植物基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)

特别提示：包括多糖多酚植物基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：多糖多酚植物基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)
英文名称：Extraction kit for genomic DNA from plant
产品货号：WH0026
产品规格：50次|200次

本试剂盒适用于从多种植物的不同组织中快速提取基因组DNA，特别适用于多酚、多糖含量高的植物组织和植物干粉。离心柱中独特的硅基质材料和其配备的缓冲溶液能有效去除植物组织中多糖、多酚复合物和酶抑制剂，纯化过的基因组DNA可直接用作PCR模板、酶切、杂交等分子生物学实验。

产品特点：
·简单快速：1h内即可获得超纯的基因组DNA。
·纯度高、质量好：纯化过的基因组DNA可直接用作PCR模板、酶切、杂交等分子生物学实验。

试剂盒组成：

组分	50T	200T
缓冲液GP1	40ml	160ml
缓冲液GP2	40ml	160ml
缓冲液GD	13ml	52ml
漂洗液PW	15ml	50ml
洗脱缓冲液TE	15ml	60ml
吸附柱CB3	50个	200个
收集管（2ml）	50个	200个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

自备试剂：液氮、无水乙醇、酚氯仿、RNaseA（可选）

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小、提取量也下降。
2．若缓冲液GP1和GP2中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，并摇匀后使用。

使用方法：
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．取植物新鲜组织约100mg或干重组织约30 mg，加入液氮充分碾磨。
2．将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700μl 65℃预热缓冲液GP1的离心管中（实验前在预热的GP1中加入巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），迅速颠倒混匀后，将离心管放在65℃水浴20 min，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
3．加入700μl氯仿，充分混匀，12000rpm （~13400×g )离心5 min。
  注：若提取富含多酚或淀粉的植物组织，可在第3步前，用酚:氯仿/1:1进行等体积抽提。
4．小心地将上一步所得上层水相转入一个新的离心管中，加入700μl缓冲液GP2，充分混匀。
5．将混匀的液体转入吸附柱CB3中，12000rpm （~13400×g )离心30 sec，弃掉废液。（吸附柱容积为700μl左右，可分次加入离心。）
6．向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7．向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
8．重复操作步骤7.
9．将吸附柱CB3放回收集管中，12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
10．将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12000rpm（~13400×g )离心2 min，将溶液收集到离心管中。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2 min，12000rpm（~13400×g)离心2 min。

DNA浓度及纯度检测：
1．得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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