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- 库存:
大量
- 英文名:
鸡源性成分LAMP试剂盒
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件:
-20度
- 规格:
50次
中文名称:鸡源性成分LAMP试剂盒
英文名称:鸡源性成分LAMP试剂盒
规格:50次
运输:低温
保存:-20度
有效期:一年
货期:一周
产品及特点
1.即开即用,用户只需要提供样品模板,操作简单,定量准确快速。
2.荧光定量 PCR 检测,反应特异性强。
3.提供阳性对照,便于分析实验结果。
4.PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳,本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
运输及保存
低温运输,-20℃保存,保存期限一年。
使用方法
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取细菌样品 DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 stn 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
1.标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2.用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(最好用带芯枪头,下同)。
3.先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
1.在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
2.换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。
3.换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。
4.NC 管中不加任何阳性对照。
5.从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值, 并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
一.PCR 检测(20 μL 体系)
1.在 PCR 管中加入下列成分(待测样品需要做三次重复,下表只列出一次)
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照,其他荧光 PCR 仪器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480)不需要使用 ROX。
建议 PCR 反应参数(具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化)
3. 数据采集
按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,最大吸收光谱在 471 nm,结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm, 最大发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
以 stn 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
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文献和实验,而 AA 大鼠会出现免疫功能紊乱,且缺乏慢性病理过程,有一定的局限性。 2. 胶原诱导的关节炎(CIA) CIA 是 Trentham[5] 等 1977 建立的实验性关节炎动物模型,多种动物的 Ⅱ 型胶原均可引起关节炎,但多用啮齿类和灵长类。CIA 作为一种内源性自身抗原介导自身免疫性疾病,是目前研究 RA 的金标准模型[6]。 造模机制:胶原蛋白(collagen)是细胞外间质成分,分为 Ⅰ 型、Ⅱ 型和 Ⅲ 型,其中 Ⅱ 型胶原大量存在于关节软骨中。当用异源性 Ⅱ 型胶原(如牛 CⅡ 或鸡 CⅡ
酶及其作用 (5)主要实验流程 2.组织类型决定制备方案的差异 (1)方案差异化的决定因素 细胞外基质(ECM)的成分与密度:例如,纤维化肿瘤的胶原蛋白含量远高于脑组织。 细胞间连接的紧密程度:上皮组织的紧密连接比淋巴组织要牢固得多。 组织内源性酶的含量:胰腺等组织富含内源性蛋白酶,解离时易发生自溶。 目标细胞类型及其敏感性:神经元等细胞对酶解和机械力非常敏感,而肿瘤细胞通常较为耐受。 (2)一张表快速了解不同组织类型 神经组织的单细胞制备是所有组织类型中最具挑战性的领域
是很高。该基因在同一种生物的不同品种中具有多态性,已经有其它的鸡的Mx基因被克隆,按道理如果该片段是Mx基因的一部分它应该与其它的鸡的Mx基因有很高的同源性才对呀,所以,我怀疑简并引物PCR扩增出来的该片段不是Mx基因,因为RACE试剂盒很贵,现在也不敢继续作下去,怕作下去得不到什么结果。现在贴上我BLAST结果中score排在最前面的部分,还请有经验的兄弟帮我分析分析。我不胜感激。 Sequences producing significant alignments: (bits
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