- ¥1490
- 联迈生物
- LM13-4120
- 中国/上海
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Puccinia pelargonii-zonalis Doidge
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件：
-20度
- 规格：
50次
中文名称：天竺葵锈病菌PCR试剂盒
英文名称：Puccinia pelargonii-zonalis Doidge
规格：50次
运输：低温
保存：-20度
有效期：一年
货期：一周
产品及特点
1.即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
2.荧光定量 PCR 检测，反应特异性强。
3.提供阳性对照，便于分析实验结果。
4.PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳，本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
使用方法
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取细菌样品 DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 stn 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
1.标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2.用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（最好用带芯枪头，下同）。
3.先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
1.在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
2.换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。
3.换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。
4.NC 管中不加任何阳性对照。
5.从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值， 并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
一．PCR 检测（20 μL 体系）
1.在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次）
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。
建议 PCR 反应参数（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）
3. 数据采集
按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm， 最大发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
以 stn 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
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文献和实验后适当灌水，以提高田间湿度，利于锈菌孢子萌发、侵染和发病。 除上述二种方法以外，还可以用喷雾法，即将配成的孢子悬浮液喷在诱发行上进行接种。接种后为了有利于锈病孢子萌发、侵染，也要进行保湿。 接种后，约二周后即可发病。但成株的抗病性鉴定一般在小麦乳熟期以后，锈病发展到高峰时进行，每个品种逐个进行调查记载。 （二）抗锈性鉴定 1．幼苗鉴定 衡量小麦品种对锈病的抗病和发病程度，常用到反应型（感染型）、严重度和普遍率三个指标。幼苗期鉴定一般考察其反应型。反应型是指植株受病菌侵染后的保卫性反应
锈病菌类 锈病菌类 （rust disease fungi） 引起植物发生锈病的真菌。属锈菌目。已发现130多属，5000余种，分别是蕨类、裸子和被子植物的专性寄生菌。在自然条件下只能在活的寄主植物体上生长，寄主植物被锈病菌类侵染后，在叶片、叶鞘或茎上长出铁锈状的孢子堆，俗称黄疸。 锈病菌的发育既具阶段性又呈多形态，生活史中产生多种类型的孢子。小麦秆锈病菌是典型代表，一生中产生5种孢子，代表着发育的不同阶段（表1）。
四个细胞，每个细胞上产生一个担孢子，锈菌的生活史可以产生几种形态学和细胞学性状不同的孢子器，并有转主寄生现象，锈菌目根据冬孢子有柄或无柄分为两个科：无柄的层锈菌科(Melampsoraceae)和有柄的柄锈菌科(Pucciniaceae)。锈菌都是专性寄生的。 1. 层锈菌科(Melampsoraceae)（1）栅锈菌属(无柄锈菌属Melampsora)冬孢子无柄，单细胞，侧面密结成整齐的单层，多生在表皮下，取亚麻锈病(M.lini)标本观察症状特点，并镜检亚麻锈病菌制备片，注意以上形态特点
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