北美大豆猝死综合症病菌PCR试剂盒产品图

北美大豆猝死综合症病菌PCR试剂盒

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  • ¥1490
  • 联迈生物
  • LM13-2460
  • 中国/上海
  • 2025年11月27日
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    • 英文名:

      Fusarium virguliforme

    • 保质期:

      一年

    • 供应商:

      上海联迈生物工程有限公司

    • 保存条件:

      -20度

    • 规格:

      50次

    产品细节图片1
    中文名称:北美大豆猝死综合症病菌PCR试剂盒
    英文名称:Fusarium virguliforme
    规格:50次
    运输:低温
    保存:-20度
    有效期:一年
    货期:一周
    产品及特点
    1.即开即用,用户只需要提供样品模板,操作简单,定量准确快速。
    2.荧光定量 PCR 检测,反应特异性强。
    3.提供阳性对照,便于分析实验结果。
    4.PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳,本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
    运输及保存
    低温运输,-20℃保存,保存期限一年。
    使用方法
    一、样品 DNA 的制备
    用自选方法提取细菌样品 DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
    二、制备 stn 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
    1.标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
    2.用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(最好用带芯枪头,下同)。
    3.先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
    1.在 6 号管中加入 5  μL 10E7 拷贝/μL  的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
    2.换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。
    3.换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。
    4.NC 管中不加任何阳性对照。
    5.从 1-6 号管中分别取 5  μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值, 并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。 
    一.PCR 检测(20 μL 体系)
    1.在 PCR 管中加入下列成分(待测样品需要做三次重复,下表只列出一次) 
    注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照,其他荧光 PCR 仪器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480)不需要使用 ROX。
    建议 PCR 反应参数(具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化)
    3. 数据采集
    按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,最大吸收光谱在 471 nm,结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm, 最大发射光谱在 530 nm。
    四、数据处理
    以 stn 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。

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