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315
- 英文名:
Auto-induction Medium
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温运输及
- 规格:
200mL
特别提示:包括自诱导培养基(lac启动子)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:自诱导培养基(lac启动子)
英文名称:Auto-induction Medium
产品货号:BTN100825
产品规格:200mL
本产品是本产品是在pET 专用生长培养基的基础上开发而成的,它利用E.coli自身对培养基中不同碳源的调控利用机制,实现外源蛋白在细菌达到饱和生长期后的自动诱发。
产品特点:
1.本产品自动诱导表达,不需要添加任何IPTG或相关诱导物,节约成本。
2.免去了密切监控菌液密度的过程,尤其适合大规模筛选。
3.极大将细菌的生长密度OD600从2左右提高20以上。
4.极大提高外源蛋白的表达量,zuì高可占细菌总蛋白的45%。
5.与各种细胞培养容器(如培养瓶、培养罐、深孔管、发酵罐等)兼容。
6.本产品即开即用,非常方便。
7.适用于T7 RNA聚合酶基因由lac启动子控制的任何表达系统,如pET系列。
8.不适用于lacZ或lacY突变的宿主菌。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 成分A | 200ml |
| 成分B | 1.25ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存,有效期两年。
使用方法:
一、培养基的配制
1.配制自诱导培养基:将1.25mL溶液B全部加入到200mL的溶液A中即得自诱导培养基。
注意:必须严格无菌操作,否则自诱导培养基非常容易长细菌。
2.贴好标签待用。如果长期时间不用,可以冻存在-20℃。
二、培养基的使用
1.将构建好的质粒转化入细菌,如BL21(DE3),涂于自备的、含有1%葡萄糖的LB培养基中(需要加入适当浓度的抗菌素),37℃培养过夜。
2.挑取单个细菌接种到自备的、含适当浓度抗菌素的液体LB培养基中,37℃培养直到菌液浑浊但不饱和(一般需要6-8小时)。
3.将所得菌液按千分之一的体积比例加入自诱导培养基中(如果自诱导培养基体积是100mL,则加入100μl菌液),同时加入适当的抗菌素。注意:在自诱导培养基中,如果使用卡拉霉素,其终浓度比一般的培养基高,需要100μg/mL。由于本方法所得菌液密度大,故需要大量氧气,因此培养基的体积不能超过三角瓶的五分之一。三角瓶底zuì好是皱褶式的,这样摇晃中氧气供应更充分。
4.37℃培养过夜,或37℃培养到菌液饱和时降低摇床的温度到所需温度(对温度诱导型启动子)。
5.收集菌液开始蛋白纯化步骤。
我公司销售的自诱导培养基(lac启动子)报价,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验实验目的 1. 掌握将目的基因插入表达载体中表达目的蛋白的技术路线和试验流程。 2. 了解通过诱导重组DNA表达目的基因的技术。 实验原理 P L P R 启动子是大肠杆菌l噬菌体中控制早期转录的启动子,具有极强的起始RNA转录的功能,基因工程中常用它来构建高效表达载体,它受抑制物CI蛋白的负调控。在实际中CI蛋白被改
培养基 是基于F. William Studier博士的技术,使用了不同代谢成分提高细胞的生长密度,并自动诱导lac启动子开始转录。Overnight Express Instant TB Medium培养基现在提供三种不同的成分。作为一种粉末装TB培养基它可快速溶解在水中,并进行微波加热和高压灭菌处理。
E.coli 的乳糖操纵子(元)含Z、Y及A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶,此外还有一个操纵序列O、一个启动子序列P及一个调节基因I.I基因编码一种阻遏蛋白,后者与O序列结合,使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态. 在启动序列P上游还有一个分解(代谢)物基因激活蛋白(CAP)结合位点.由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区,三个酶的编码基因即由同一调控区调节,实现基因产物的协调表达 。 在没有乳糖存在时,lac操纵子(元)处于阻遏
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