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- 百奥莱博
- BTN101219-CUJ
- 北京
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
420
- 英文名：
Instant Realtime RT-PCR Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存，
- 规格：
50次
特别提示：包括即用型荧光定量RT-PCR试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：即用型荧光定量RT-PCR试剂盒
英文名称：Instant Realtime RT-PCR Kit
产品货号：BTN101219
产品规格：50次
本产品是基于荧光染料检测的即用型双酶一管式RT-PCR试剂盒，可以对靶片段进行实时定量RT-PCR分析(quantitative RT-PCR、qRT-PCR)。产品含有经过优化的缓冲液组分、MMLV-Taq DNA聚合酶混合物、dNTPs、MgCl2及新型荧光染料DNAgreen等所有一管式实时定量RT-PCR所需要的成分，用户只需加入RNA模板和引物即可进行实时定量RT-PCR反应，具有广泛的用途。
产品特点：
1.一管式完成qRT-PCR反应，避免样品交叉污染，尤其适合临床应用。
2. 即开即用，用户不需要单独准备qRT-PCR所需的各种试剂。
3. 主要成分只有两个(RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix)，将加样步骤减少到zuì低，极大降低了加样误差，增加了可重复性。
4. 使用范围广，适用于从病毒RNA到人RNA的各种RNA模板。
5.高灵敏度，每个RT-PCR体系zuì低可以检测200拷贝的RNA分子，可扩增的模版RNA的zuì长达2000nt。
试剂盒组成：
| 成分 | 规格 |
| 双酶一管式qRT-PCR Buffer，2× | 750μl |
| MMLV-Taq Mix | 100μl |
| RNase-free水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。
使用方法：
1.在一干净的无RNase的PCR管中，先加入下列成分(下面只列出样品管的设置情况，用户可自己根据需要设置阳性和阴性对照)：
| 成分 | 样品 |
| 自备RNA模板(分下面三种情况) | 见下 |
| 总RNA | 100-500ng |
| 或poly(A)mRNA | 10-500ng |
| 或体外转录得到的专一RNA | 0.01pg-500ng |
| RNA特异性引物一(自备) | 终浓度300nM(注1) |
| RNA特异性引物二(自备) | 终浓度300nM |
| RNase-free水 | 补到10μL |
| 双酶一管式qRT-PCR Buffer(2×) | 15μl |
| 自备ROX(某些荧光PCR机型需要) | 3μL(注2) |
| MMLV-Taq Mix | 2μl |
注1：通常初次使用本试剂时，可用引物浓度300nM进行实验，根据实验结果具体情况，在200～800nM范围内调整引物浓度。引物、待检样品的具体加量用户可以根据实际情况调整，同时增减RNase-free水用量，保证总反应体积不变即可。
注2：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三种型号的荧光PCR仪器，则需用自备的ROX进行Ct值校正。对ABI 7700和7900，ROX的zuì佳浓度为1×(即在每30μl反应体系中加3μl 10×ROX)。对ABI 7500，ROX的zuì佳浓度为0.05-0.1×(每30μL反应体系加0.3μL 10×ROX；也可将10×ROX稀释到1×，然后每个反应体系加入3μL 1×ROX)。ROX会在溶解曲线中产生噪音，因此，如果出现了杂峰，将软件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”选项取消打勾，然后重新分析数据。对于iCycler IQ，MJ Opticon，MJ Chromo4，MX3000，MX4000，RotorGene3000，RotorGene 6000和LightCycler 480等型号的荧光PCR仪器，ROX不是必须的，但加入的话也不会影响整个PCR分析。
2. 轻柔混合均匀后放入PCR仪中进行荧光定量RT-PCR。
3. 设定RT-PCR反应条件时，一般将RT的条件设定成42℃ 30分钟，后接94℃变性5分钟，然后进入PCR循环(PCR参数将根据自备引物的Tm值和PCR产物长度由用户自行决定注)、zuì后72℃ 5分钟。并在退火或延长步骤中记录荧光信号。本产品中所含的荧光染料在没结合DNA时，zuì大吸收光谱在471nm，结合DNA时的zuì大吸收光谱在500nm，zuì大发射光谱在530nm。
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actin,山东大学提供样品基因。cDNA制备：测定小鼠肝脏总RNA浓度后，使用BioTeke Super RT Kit 制备20μl cDNA.操作步骤参照试剂盒说明书。一步法荧光定量PCR：Bioteke One-step SYBR real-time RT-PCR Kit20μl反应体系包括：10μl 2×One-step SYBR premixture，7.2μl RNA Free Water，0.4μl Primer F，0.4μl Primer R，1μl cDNA，1μl One-step
怎么整板都没有扩增曲线，是哪一步实验出问题了吗？ 这个病原体这段时间怎么经常检出？不会是有污染了吧？ 在您看到荧光定量 PCR 结果的时候是否也有过这样的疑问？隐隐约约感觉实验某个步骤出现问题，却又不知该从何下手。别担心，有「对照精灵」们来助您一臂之力。 荧光定量 PCR 实验，从样本采集到结果分析包含多个实验步骤，针对不同的步骤，可以选择不同的对照对流程进行监控（图 1）。 图 1. 实验流程和常见阴阳性对照种类。 阴性对照 荧光定量 PCR 的灵敏度可以达到 1 拷贝/孔，如此高灵敏
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