Calibrite PerCP校准微球

流式课堂 | 流式实验对照设置之 FMO

大部分老师做流式实验时，会用到空白对照、单阳对照、同型对照、生物学对照等，用到 FMO 对照的比较少。尽管如此，FMO 对照在设置圈门时仍具有重要的参考价值。 一方面，FMO 对照有助于精确地设置阴阳性群体界限。我们在做多色实验时，可能会出现某些通道信号难以区分的情况，主要是因为其他某个荧光对该通道的干扰很大。FMO 对照（Fluorescence Minus One，荧光扣除一）减少了其中一个通道的荧光抗体，能够帮助衡量其它通道的荧光漏溢情况。 如下图所示，PerCP/Cyanine

激活的淋巴细胞内细胞因子的检测

前可以在 4 ℃避光放置 24 小时。七、分析1 、应用 BD FACS 流式细胞仪分析。2 、使用 CaliBRITE 标准微球， FACSComp(1.1 版本以上 ) 软件调节流式细胞仪 PMT 电压，荧光补偿，灵敏度。3 、用 CellQuest 获取，用荧光或 FSC 设阈值，一般门内收集 10 ， 000 细胞。4 、设门圈定 FL3+ 细胞。以双色点图显示细胞因子的表达。可以用 CellQuest ， Attractors 分析

流式细胞仪检测外周血树突状细胞

50uL全血，振荡混匀，暗处冰浴反应25分钟； 3. 轻轻混匀，加入1mL洗液； 4. 300xg离心5分钟，弃上清； 5. 轻轻混匀，加入300uL 1%多聚甲醛； 6. 2-8°C暗处保存，24小时内上机分析 数据获取： 1. 使用CaliBRITE微球，做FACSComp，调整PMT电压和荧光补偿，检查仪器灵敏度； 2. 上样：使用CELLQuest软件，获取50,000个细胞，用FSC设阈值，排除碎片干扰； 3. 使用CELLQuest软件分析结果