MagCapture™ RNA Pull Down检测试剂盒

MagCapture™ RNA Pull Down检测试剂盒

 

本试剂盒包含新型链霉亲和素样蛋白Tamavidin^® 2的突变体、可洗脱的生物素样Tamavidin^® 2-REV的固定化磁珠以及Wako专用的洗脱用缓冲液。

本品可应用于生物素化RNA（bait RNA）的RNA Pull Down，所拉下来的含有生物素化RNA的核糖核蛋白（RNP）复合物无需变性，即可通过生物素竞争性洗脱回收。

因此，与使用SDS等变性剂的洗脱法相比，本试剂盒优势为可减少目的蛋白中的非特异性蛋白。可有效应用于对于确定与目的RNA相互作用的蛋白以及功能未知的新型长链非编码RNA（lncRNA）的功能分析。

 

◆Tamavidin^® 2-REV~和生物素可逆结合功能

Takakura, Y. et al.: "Tamavidin^® 2-REV : an engineered tamavidin with reversible biotin-binding capability.", J. Biotechnol., 164(1), 19-25(2013).

 

Tamavidin^® 2-REV是新型链霉亲和素样蛋白Tamavidin^® 2的突变体。通过减低与生物素的亲和力，可以形成可逆性的生物素结合复合物。因此，通过添加过量的生物素，可以竞争性洗脱生物素化分子。

（传统的链霉亲和素（抗生物素蛋白）和生物素的结合力非常牢固，发生不可逆的结合。）

 

试剂盒内容    10次反应
RPD捕获磁珠——500 μL RPD洗涤缓冲液——55 mL RPD细胞裂解缓冲液——25 mL RPD重组缓冲液——1500 μL RPD生物素洗脱缓冲液——1000 μL

 

 

◆操作步骤概述

 

 

 

◆应用数据 ~以HOTAIR RNA^※ 进行RNA Pull Down分析～

 

※HOTAIR是一种与肿瘤发生密切相关的lncRNA

 

银染   bait RNA：生物素标记HOTAIR RNA正义链   洗脱：Sample Buffer、4%SDS溶液、   洗脱：试剂盒附带的生物素溶液   样本：K562细胞（1×107 细胞）的总细胞裂解液     Western Blot   一抗：抗Ezh2抗体   二抗：抗兔IgG（Fc）单抗，POD结合   二抗：（Code No. 016-23943）   与传统产品相比，本试剂盒可获得低背景的RNA结合蛋白。

 

产品编号	产品名称	规格	包装
297-77501	MagCapture™ RNA Pull Down 检测试剂盒 MagCapture™ RNA Pull Down Assay Kit	基因研究用	10 次

 

 

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◆MagCapture™ Tamavidin^® 2-REV

◆MagCapture™ HP Tamavidin^® 2-REV

 

本品是Tamavidin^® 2-REV固定化磁珠，有两种不同的粒径。

※ MagCapture^TM HP Tamavidin^® 2-REV 为小粒径型。

 

 

应用数据 ～以HOTAIR RNA进行RNA Pull Down分析/MagCapture™Tamavidin^® 2-REV

 

与Streptavidin的性能比较     银染   bait RNA：生物素标记HOTAIR RNA正义链   洗脱：Sample Buffer   样本：K562细胞（5×106细胞）的总细胞裂解物     Western Blot   一抗：抗Ezh2抗体   二抗：抗兔IgG（Fc）单抗，   二抗：POD结合（Code No. 016-23943）   与普通Streptavidin产品相比，本试剂盒可获得低背景的   RNA结合蛋白。

 

 

应用数据～以HOTAIR RNA进行RNA Pull Down分析/MagCapture™ HP Tamavidin^®2-REV

 

 

与MagCapture™ Tamavidin® 2-REV比较回收量     银染   bait RNA：生物素标记HOTAIR RNA正义链   洗脱：Sample Buffer   样本：K562细胞（5×106细胞）的总细胞裂解物     Western Blot   一抗：抗Ezh2抗体   二抗：抗兔IgG（Fc）单抗，   二抗：POD结合（Code No. 016-23943）   通过使用MagCapture™ Tamavidin® 2-REV，RNA蛋白的   回收量提升了（SDS sample buffer洗脱）

 

产品编号	产品名称	规格	包装
136-18341	MagCapture™ Tamavidin® 2-REV RNA回收试剂 MagCapture™ Tamavidin® 2-REV	基因研究	2 mL
133-18611	MagCapture™ HP Tamavidin® 2-REV RNA回收试剂 MagCapture™ HP Tamavidin® 2-REV		2 mL

 

 

 

◆重组Tamavidin^® 2系列

 

本系列产品是从榆黄蘑（Pleurotus cornucopiae，蘑菇的一种）中克隆的链霉亲和素样生物素结合蛋白Tamavidin^® 2的突变体。对比野生型的Tamavidin^® 2，本系列产品各有优势，可根据用途选用对应的产品。

 

产品名称	等电点（pl）※1	耐热性※2	有机溶剂耐受性	生物素结合速度常数 (ka(M-1S-1))	生物素解离速度常数 (kd(S-1))	分子量 (四聚体)
Tamavidin® 2	7.4	Tm=85℃	有	(1.0±0.5)×106	低于检测下限※4	约60   kDa
Tamavidin® 2-REV	8	Tm=75℃	-	(1.3±0.5)×106	(1.5±0.4)×10-5	约60   kDa
Tamavidin® 2-HOT	7.23	耐热性高	耐受性高※3	(3.0±1.7)×105	低于检测下限	约60   kDa

 

※1 等电点：只有Tamavidin^® 2-LPI是实测值。其余是根据氨基酸序列计算得到的数值。

※2 耐热性(Tm值)：加热20分钟后，生物素结合活性为加热前50%时的温度。Tamavidin^® 2-HOT，

※2 耐热性(Tm值)：在99.9°C下，加热30分钟后结合活性依然保持在90%以上，因此无法计算其Tm值。

※3 耐受性高：40-50％ DMSO中。

※4 检测界限值：5×10^-6(kd(S^-1))

 

 

产品编号	产品名称	特点	规格	包装
205-18263	Tamavidin® 2, recombinant     Tamavidin® 2, 重组型		免疫化学用	5 mg
203-19401	Tamavidin® 2-REV, recombinant     Tamavidin® 2-可逆型, 重组型	与生物素的可逆性结合	免疫化学用	1 mg
209-19403				5 mg
205-19363	Tamavidin® 2-HOT, recombinant     Tamavidin® 2-耐热型, 重组型	超耐热·耐有机溶剂		5 mg

根据有关许可，Tamavidin^® 是日本Tabako产业株式会社的注册商标。Tamavidin^® 由日本Tabako产业株式会社授权给FUJIFILM Wako进行销售。