BJ5183电击感受态细胞价格

特别提示：包括BJ5183电击感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：BJ5183电击感受态细胞
英文名称：BJ5183 Electroporation-Competent Cell
产品货号：MQ0028
产品规格：5×50μl/20×50μl

BJ5183是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株，是目前腺病毒系统zuì常用的感受态细胞。
BJ5183菌株含有sbcBCrecBC双重突变，赋予BJ5183细胞较强的重组能力，有利于转入的目的基因与腺病毒质粒{pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome(E1/E3 deleted)]或pAdeasy-2[encodes the Adenovirus-5 genome(E1/E3/E4 deleted)]}的重组。endA1(缺失核酸内切酶)的突变有利于重组DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。Strr赋予BJ5183菌株链霉素抗性。
BJ5183电击感受态细胞适用于普通质粒和大质粒的构建，经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>1010cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
endA1sbcBCrecBCgalKmet thi-1bioThsdR(Strr)
操作说明：
1.0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2.取-80℃保存的BJ5183电击感受态细胞插入冰中5分钟，待其融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。
A.测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒pUC19；
B.对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液(10 mM Tris HCl，pH7.5;1 mM EDTA)重悬，DNA浓度不超过100 ng/μl，体积不超过5 μl/50 μl感受态。
3.用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
4.启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV(此为BioRad电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作)，将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
5.2分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入700 μl不含抗生素的无菌S.O.C.培养基(室温)，用1ml枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50 ml离心管(BD Falcon 50 ml锥形离心管等)，向离心管中补加S.O.C.培养基至10ml。37℃，225 rpm复苏60分钟。
6.5000 rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200μl涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上(因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项：
1.加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。
2.电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3.当DNA不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4.电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5.若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
6.对于连接产物转化，zuì好转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液(10 mM Tris HCl，pH7.5;1 mM EDTA)重悬产物，保证 DNA浓度不超过100ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7.混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少zuì终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞zuì好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。

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