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- 2025年07月08日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
‘-20℃保存
- 保质期：
有效期一年
- 库存：
30
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 规格：
50次
| 编号 | 成分 | 十孔盒包装（去纸托） |
| 试剂一 | 2×PCR MagicMix | 1mL（亮黄盖） |
| 试剂二 | 成分 PCR 引物混合液 | 100 uL（白盖） |
| 试剂三 | 成分 PCR 阳性对照 | 50 uL（黄盖） |
| 试剂四 | 超纯水 | 1 mL（本色盖） |
| 试剂五 | DNA 释放剂试用装 | 50 次（成分见下） |
| 试剂六 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分一 | 50 uL（白盖） |
| 试剂七 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分二 | 100uL（绿盖） |
| 试剂八 | 免 DNA 提取试剂溶液 B | 400 uL（红盖） |
| 试剂九 | 使用手册 | 1 份 |
简并性引物对PCR扩增有无影响?
有影响。简并数量应尽量少。
通常一条引物中简并的碱基不要超过4处，如果简并的碱基数过多，则会造成反应体系中有效引物的量相对减少，此时应适当增加引物的使用量。但引物量过大，容易引起非特异扩增，应加以注意。
适合的模板添加量是多少?
根据基因组DNA、质粒DNA及反转录产物等模板种类不同，PCR反应的适合模板添加量也不同。 特别是使用PrimeSTAR® HS DNA Polymerase时，过剩的模板量有时会对PCR扩增产生阻害作用。 另外，使用PrimeSTAR® Max DNA Polymerase时，根据模板种类、模板使用量及模板质量可调整PCR反应条件。
使用PrimeSTAR® Max DNA Polymerase时，模板可按以下推荐量添加（50 μl反应体系）：
· Human genomic DNA：5～200 ng
· E.coli genomic DNA: 100 pg～100 ng
· cDNA Library：1～200 ng
· λDNA：10 pg～10 ng
· 质粒DNA：10 pg～1 ng
PCR产物 (3‘端附有A碱基时) 经末端平滑后，克隆于去磷酸的平滑末端载体时，其PCR产物需不需要5′末端磷酸化?
需要。一般的PCR用引物5′末端都不带磷 (除非在引物合成时已特别标记)。使用这种引物进行PCR的PCR产物经末端平滑化后，与去磷酸的平滑末端载体连接之前，PCR产物必须进行5′末端磷酸化。
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文献和实验请教real time PCR的RT部分能否使用传统半定量RT-PCR试剂盒的反转录部分？
各位老师： 您们好！偶欲做几个基因的RT-PCR实验。偶先用传统的半定量两步法RT-PCR试剂盒(TaKaRa DRR019A)扩增了几个基因，并用该试剂盒反转录了不少cDNA。但还有2个基因偶打算用real time PCR法来扩增。拟采用TaKaRa DRR041S试剂盒。但是TaKaRa DRR041S试剂盒说明书上写的反转录步骤是使用另外一个单独的RT Reagents (TaKaRa DRR033A)，得到cDNA再用TaKaRa DRR041S试剂盒扩增。但是仅一个RT
的5'和3’末端的有效方法，以其简单、快速、廉价等优势而受到越来越多的重视。经典的RACE技术是由Frohman等(1988)发明的一项技术，主要通过RT-PCR技术由已知部分cDNA序列来得到完整的cDNA5’和3’端，包括单边PCR和锚定PCR。该技术提出以来经过不断发展和完善，克服了早期技术步骤多、时间长、特异性差的缺点(Frohman等,1995:Schaefer,l995: Chen,1998: Bespalova等,1998: Matz等11999)。对传统RACE技术的改进主要是引物设计及RT-PCR
要的所有组分。可以用来从低至0.1pg的总RNA中检测看家基因（housekeeping genes）（见图2），以及通过RT-PCR从长达12kb的靶标中合成高产量的cDNA。 在室温度下运输、贮存和组合反应混合物,使得这个RTS试剂盒成为进行多种RT-PCR应用的理想选择。 图2-SuperScript™III RTS First-Strand Synthesis System以方便的形式提供高灵敏度 使用
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