人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞 (NK-92)

人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞 (NK-92)
细胞介绍：
NK-92是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍 生来的一株白细胞介素-2依赖型NK细胞株。这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562和Daudi细胞。NK-92细胞(经过照射以防止 增殖)可以有效地用于血液中白血病的体外免疫清扫而不危及血细胞的功能。NK-92细胞有以下特征：CD2, CD7, CDlla, CD28, CD45, CD54表面标记阳性，CD56 亮;CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34 和 HLA-DR 表面标记阴性。
 
细胞特性：
1)来源：恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞
2)形态：淋巴母细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装

人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞 (NK-92)运输和保存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供科研使用。

细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基，75%;添加 0.2mM 肌醇，O.lmM 0-Me，0.02mM叶酸，100UIL-2，马血清12.5%，北美胎牛血清，12_5%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞 (NK-92)对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细 胞悬液按1: 2到1: 3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞冻存：待细胞生长状态良时，可进行细胞冻存。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀， 按每lml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。