sgRNA合成

2024年，Martin 、Oana Pelea和Martin共同撰写的《Past, present and future of CRISPR genome editing technologies》在《Cell》杂志发表。

这篇综述旨在为读者提供一个关于CRISPR技术演进的全面视角，探讨其在基础研究和人类医学中的当前应用，以及面临的技术挑战和未来发展的方向。

CRISPR-Cas9技术为基因组编辑领域带来了革命性的变革，因其在简化基因编辑过程中的突出贡献，Emmanuelle Charpentier和Jennifer A. Doudna被授予了2020年诺贝尔化学奖。

特征	Cas9	Cas12a（Cpf1）
来源	Streptococcus pyogenes	Lachnospiraceae bacterium和Prevotella sp.
PAM	NGG	TTTN
切割机制	在PAM序列之前的3个核苷酸处产生双链断裂	在PAM序列远端产生双链断裂
gRNA	crRNA+tracrRNA  OR  sgRNA	只需要一个crRNA
编辑范围	适用于大多数遗传编辑任务	在特定应用中可能更有优势，尤其是AT富集区域
特点	高效率和特异性，广泛使用	在减少非特异性靶向方面可能更优，允许更长的插入片段

• DSB的基因编辑：利用Cas9和Cas12a核酸酶进行基因敲除和有限的HDR介导敲入编辑。

• 碱基编辑：通过Cas9切口酶与核苷酸修饰酶的融合体实现单个核苷酸碱基的直接转换。

• 主编辑：结合Cas9切口和逆转录酶，使引导RNA实现短DNA序列的插入、删除和替换。

• 转录调节器和RNA编辑器：使用去活化的Cas9 (dCas9) 与转录调节域融合，以及利用RNA靶向的Cas13核酸酶进行转录物的降解或编辑。

《A novel CRISPR_Cas14a-based electrochemical biosensor for ultrasensitive detection of B with PtPd@PCN-22》文献于2023年发表在《Biosensors and Bioelectronics》杂志上。

本文介绍了一种新型的CRISPR/Cas14a基电化学生物传感器，用于超灵敏检测伯克霍尔德菌的DNA，sgRNA（单向导RNA，small guide RNA）扮演了核心角色，是实现对目标DNA序列特异性识别和切割的关键因子。sgRNA是CRISPR/Cas系统的组成部分，它通过与Cas蛋白结合形成复合体，指导复合体识别并切割特定的DNA序列。在CRISPR/Cas14a系统中，sgRNA的设计对于实现对伯克霍尔德菌DNA的高特异性识别至关重要。

sgRNA(222nt) was transcribed in vitro by Huzhou Hippobio Technologies Co., Ltd. (China).

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产品名称： sgRNA合成

服务内容：
优异的sgRNA合成和纯化技术，提供优质的sgRNA合成服务，运用于基因编辑，基因检测等领域，独家的长链RNA合成技术，支持1nt--100nt sgRNA合成，可选择LNA，2-OMe等稳定RNA的修饰，可提供各种复杂类型的定制修饰；

服务承诺：
专业的sgRNA合成和纯化技术确保您实验顺利;
提供Thermo LTQ XL 高精度质谱报告和 Waters 高效液相色谱纯度检测报告；
高精度质谱，单一主峰，理论分子量与检测分子量一致；纯度大于90%；
提供sgRNA详细操作手册，博士技术支持指导；


服务特色：
超短链DNA/RNA合成，可提供短至2nt DNA/RNA合成服务。
超长链DNA/RNA合成，可提供最长200nt DNA、70nt RNA合成服务。
DNA/RNA修饰种类多，经验丰富。
修饰DNA/RNA合成质谱全检，waters高效液相色谱全检，客户可放心使用。
合成规模灵活，可提供微克至百克级合成服务。
发货迅速，常规修饰2-3个工作日发货。
临床检测级别纯度大于99%，高稳定性，无交叉污染。

寡核苷酸应如何保存?
DNA干粉很稳定，-20℃下保存2年没问题。DNA的溶解可以用无菌的水或TE，溶解后的DNA最好分装置于-20℃保存于-20℃，且在使用时避免反复冻融。短期内（2、3个星期）反复使用的DNA可在4℃保存。溶解后的DNA应避免室温存放，一般在室温放置超过一周的不建议继续使用。
RNA由于其稳定性远差于DNA，因此 不论是干粉还是溶液状态，都建议在-80℃保存，若无条件，则存放于-20℃，且溶液状态的RNA要避免反复冻融。修饰寡核苷酸建议最高存放于-20℃，带荧光的修饰需要避光保存。