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真核表达,抗原性佳,有客户用于制备亚单位疫苗研究。
新城疫病毒(NDV)的F蛋白是病毒的重要结构蛋白之一,以下是对其的详细介绍:
一、基本特性
- 定义:新城疫病毒F蛋白是新城疫病毒包膜上的一种糖蛋白,具有融合细胞的功能。
- 基因与编码:F基因全长1662bp,编码一个553个氨基酸的多肽,单体的分子量为65KD。F蛋白能够相互交联形成寡聚体,主要寡聚体的分子量为195KD,次要寡聚体的分子量为130KD。
- 结构:F蛋白包括极状疏水区(位于F蛋白末端)和几个亮氨酸折叠区(HR区)。F0有一个多基部式序列,包含一个C端螺旋结构区(AAH)和HR区。AAH区一端与融合蛋白区连接,另一端与跨膜区相连。F蛋白的N端有一段可被切割的信号肽序列,能够引导新生的多肽链穿过内质网膜,并通过C端疏水性的终止转移域或跨膜域将新生肽链锚定在膜中。
二、功能与作用
- 细胞融合:F蛋白具有诱导细胞融合而破坏细胞的作用,但需要同源HN蛋白的辅助才能完成。在病毒感染过程中,F蛋白与HN蛋白共同介导病毒囊膜与宿主细胞膜的融合,从而使病毒进入细胞进行复制。
- 免疫原性:F蛋白是新城疫病毒的主要抗原之一,可诱导机体产生抗体。利用F蛋白的免疫原性,可以制备多肽疫苗,用于保护靶细胞免受病毒的侵染。
三、与病毒毒力的关系
- 裂解位点:F蛋白的裂解位点的序列与病毒毒力密切相关。强毒株的F蛋白裂解位点可被多种宿主组织或器官中的蛋白酶裂解,因此病毒可以在多种组织或器官中增殖,引发全身性感染。而弱毒株的F蛋白裂解位点则仅能被有限的特异性的宿主酶裂解,病毒只能在有限的组织或器官中增殖,对宿主造成的损害较轻。
- 基因型与毒力:根据F基因高变区序列可将NDV划分成不同的基因型,各基因型毒株致病力存在差异。因此,F蛋白的不同基因型在对分析ND的流行规律方面的作用不容忽视。
四、研究与应用
- 疫苗研发:基于F蛋白的免疫原性,研究者们正在开发针对新城疫病毒的多肽疫苗。这些疫苗有望为预防新城疫提供新的有效手段。
- 流行病学调查:通过分析F蛋白的基因序列,可以了解新城疫病毒的遗传变异情况和流行规律,为制定防控策略提供科学依据。
综上所述,新城疫病毒F蛋白是病毒的重要结构蛋白之一,具有细胞融合、免疫原性以及与病毒毒力密切相关的特性。在研究新城疫病毒的致病机理、疫苗研发以及流行病学调查中,F蛋白都发挥着重要作用。
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在哺乳动物细胞中进行RNA干扰:设计,实验和分析siRNA效应 转录后基因沉默,也称为RNA干扰,是指双链RNA分子阻断或者降低同源基因的表达的现象。这种现象可能是作为一种抑制病毒感染和转座子跳跃的细胞防御机制(Ketting et. al., 1999; Tabara et. al., 1999; Jensenet. al., 1999; Ratcliff et. al., 1999)。在体内,双链RNA被内源的核糖核酸酶降解为21-23个碱基大小的小分子干扰RNA(small
型的蛋白,或进行高解析度的结构分析,愈来愈多的实验组选择哺乳类表达系统来生产融合蛋白。其原因为哺乳动物细胞生产出的重组蛋白与人类蛋白十分相似,有较完整的蛋白折叠、组合及翻译后修饰[3]。因此,愈来愈多科学家们更加关注于—如何从哺乳类细胞中高效的纯化目标蛋白。1 亲和标签的选择首先,需考虑选择合适的亲和标签。常用于哺乳动物表达系统的亲和标签有 His-tag、FLAG-tag、GST-tag及 Strep-tag® 等[4-12],整理于下表:(点击放大查看)这些亲和标签在使用上各有千秋。使用
将制备好的siRNA、siRNA 表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种:磷酸钙共沉淀;电穿孔法;DEAE-葡聚糖和polybrene;机械法;阳离子脂质体试剂。目前用的最多的是阳离子脂质体法。
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